不同猪种脂肪细胞分化因子的差异表达研究

发布时间：2017-10-02 04:02

  本文关键词：不同猪种脂肪细胞分化因子的差异表达研究

  更多相关文章： 从江香猪 江口萝卜猪 大白猪 PPARγ C/EBPα ADD1 表达量 肉质性能 相关性

【摘要】：本项目以江口萝卜猪为试验材料构建DNA池,采用测序技术筛查PPARγ、C/EBPα、ADD1基因多态性,并作相关生物信息学分析;以3、4、5、6、7月龄的江口萝卜猪、从江香猪和大白猪为试验材料,提取心、肝、脾、肺、肾、小肠、背最长肌和皮下脂肪的总RNA,应用实时荧光定量PCR技术检测PPARγ、C/EBPα、ADD1基因在3个品种不同月龄各组织中mRNA的相对表达量,并结合屠宰试验进行PPARγ、C/EBPα、ADD1基因表达水平与其肉质性能的相关性分析。获得主要结果如下:1.本研究对江口萝卜猪PPARγ、C/EBPα、ADD1基因进行多态位点检测。PPARγ基因共筛查出8个多态位点,其中位于外显子上有3个,其余5个均位于内含子上;ADD1基因共筛查出3个多态位点,其中位于外显子上有1个,2个位于内含子上;C/EBPα基因未检测出多态位点。位于PPARγ基因3个外显子中,exon2-C50T、exon7-G53T、exon9-C32T均为错义突变,对应的氨基酸由苏氨酸(Thr)改变为异亮氨酸(Ile)、天冬氨酸(Asp)改变为酪氨酸(Tyr)、丙氨酸(Ala)改变为天冬氨酸(Asp);位于ADD1基因外显子上的exon8-G87A位点为同义突变,其突变未引起氨基酸的改变。对引起错义突变的多态位点进行生物信息学分析表明突变前后mRNA二级结构、蛋白质二级、三级结构均有差异。2.PPARγ、C/EBPα、ADD1在大白猪3、4、5、6、7月龄各组织中均有表达,在肝、小肠、背最长肌、皮下脂肪的表达水平较高,心、脾、肺、肾的表达水平较低。其中PPARγ在小肠、背最长肌、皮下脂肪中3、4月龄分别与6、7月龄的表达量差异极显著(P0.01)。C/EBPα、ADD1在肝、肺、小肠、皮下脂肪中3月龄与6、7月龄差异极显著(P0.01);PPARγ、C/EBPα、ADD1在江口萝卜猪心、脾、肺、肾、背最长肌的表达量最低,在皮下脂肪中最高,具有组织特异性。其表达量随月龄递增而上升,皮下脂肪的增加幅度最大。其中PPARγ、ADD1在小肠、背最长肌、皮下脂肪中3、4月龄与6、7月龄的表达量差异极显著(P0.01)。C/EBPα在小肠、皮下脂肪中3月龄与5、6、7月龄的表达量均差异极显著(P0.01);PPARγ、C/EBPα、ADD1在从江香猪心、肝、脾、肺、肾、小肠、背最长肌的表达量较低,在皮下脂肪的表达量最高,PPARγ的表达量随月龄增加而上升的幅度较小,C/EBPα、ADD1在各组织中的表达量随时间增加而上升。其在小肠、皮下脂肪、背最长肌中3、4月龄与6、7月龄的表达量差异极显著(P0.01)。总体上PPARγ、C/EBPα、ADD1基因在各组织均有表达,组织间的表达量存在差异,皮下脂肪的表达量最高,其次肝、肺、小肠、背最长肌中较高,心、脾、肾中的表达量最低,其中在肝、小肠、皮下脂肪中为高丰度表达。随着月龄的增加,PPARγ、C/EBPα、ADD1基因mRNA的表达模式基本相同,总体呈现上升趋势,6、7月龄的表达水平较高,即随着月龄的增加而逐渐上升,到生长后期维持一个相对稳定水平。不同品种间PPARγ、C/EBPα、ADD1在相同月龄各组织中的表达量存在差异,总体上大白猪肝、小肠、皮下脂肪中PPARγ、C/EBPα、ADD1 mRNA的表达量分别与江口萝卜猪、从江香猪差异显著(P0.05)。综合而言,PPARγ、C/EBPα、ADD1基因在脂肪型江口萝卜猪、从江香猪的表达量高于瘦肉型大白猪。3.从江香猪、江口萝卜猪、大白猪肌肉的大理石纹、pH值、剪切力、肌内脂肪含量、粗蛋白含量随着月龄的增加而升高,失水率、滴水损失、水份含量、蒸煮损失随着月龄的增加而下降。从江香猪、江口萝卜猪其肉质性能测定均在正常范围之内,大白猪中其大理石纹评分、肉色评分、肌内脂肪含量在3、4月龄时较低,之后随着月龄增加而上升到正常值。总体上从江香猪、江口萝卜猪的肌内脂肪含量比大白猪高,6、7月龄时为4%以上。PPARγ、C/EBPα、ADD1基因在从江香猪、江口萝卜猪、大白猪的表达量与肉质性能均为正相关。在心、脾、肺、肾的表达量与肉色、pH值、滴水损失、大理石纹、失水率、蒸煮损失、剪切力、水份含量、粗蛋白含量、肌内脂肪含量相关性较小,在肝、小肠、背最长肌、皮下脂肪的表达量与大理石纹、剪切力、肌内脂肪含量、粗蛋白含量有较高相关性。
【关键词】：从江香猪 江口萝卜猪 大白猪 PPARγ C/EBPα ADD1 表达量 肉质性能 相关性
【学位授予单位】：贵州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S828
【目录】：

• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 第一章 文献综述12-31
• 第一节 脂肪沉积及其调控的研究12-18
• 1.1 脂肪组织的发育规律12-13
• 1.2 脂肪组织的功能13-14
• 1.3 脂肪细胞的分化14-16
• 1.4 脂肪沉积的调控16-18
• 第二节 肌内脂肪与肉质性能的相关研究18-21
• 2.1 肌内脂肪的生成及研究现状19
• 2.2 肌内脂肪对肉品质的影响19-21
• 第三节 脂肪细胞分化相关基因的研究进展21-29
• 3.1 脂肪细胞分化相关转录因子PPARs基因家族21-26
• 3.2 脂肪细胞分化相关转录因子C/EBPs基因家族26-28
• 3.3 脂肪细胞分化相关转录因子ADD1基因28-29
• 第四节 研究目的及意义29-31
• 第二章 江口萝卜猪PPARγ、C/EBPα、ADD1基因的多态性检测31-42
• 2.1 试验材料31-32
• 2.1.1 试验样本31
• 2.1.2 主要仪器设备31-32
• 2.1.3 主要试剂32
• 2.2 试验方法32-35
• 2.2.1 基因组DNA提取32-33
• 2.2.2 基因引物设计33-34
• 2.2.3 PCR扩增34
• 2.2.4 测序及序列分析34
• 2.2.5 生物信息学分析34-35
• 2.3 结果与分析35-40
• 2.3.1 DNA提取结果35
• 2.3.2 PCR扩增结果35-36
• 2.3.3 测序结果36-38
• 2.3.4 mRNA二级结构分析38-39
• 2.3.5 蛋白质二级结构分析39
• 2.3.6 蛋白质三级结构分析39-40
• 2.4 讨论40-41
• 2.5 结论41-42
• 第三章 PPARγ、C/EBPα、ADD1基因的表达规律研究42-61
• 3.1 材料与方法42-44
• 3.1.1 试验动物42
• 3.1.2 试验仪器42
• 3.1.3 主要试剂42
• 3.1.4 引物的设计与合成42-43
• 3.1.5 总RNA提取及逆转录43-44
• 3.1.6 荧光实时定量PCR44
• 3.1.7 数据分析44
• 3.2 结果与分析44-58
• 3.2.1 总RNA提取结果44-45
• 3.2.2 荧光定量PCR扩增曲线和熔解曲线45-46
• 3.2.3 同一品种不同时期各组织PPARγ、C/EBPα、ADD1基因的表达差异46-54
• 3.2.4 不同品种相同时期各组织PPARγ、C/EBPα、ADD1基因的表达差异54-58
• 3.3 讨论58-60
• 3.4 结论60-61
• 第四章 猪肉质性能测定及基因表达量与其相关性分析61-74
• 4.1 材料与方法61-64
• 4.1.1 试验动物61
• 4.1.2 主要仪器61
• 4.1.3 肉质性能测定61-64
• 4.1.4 数据分析64
• 4.2 结果与分析64-72
• 4.2.1 江口萝卜猪肉质性能及其与基因表达的相关性分析64-67
• 4.2.2 大白猪肉质性能及其与基因表达的相关性分析67-69
• 4.2.3 从江香猪肉质性能及其与基因表达的相关性分析69-72
• 4.3 讨论72-73
• 4.4 结论73-74
• 参考文献74-87
• 致谢87-88
• 附录88-89

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