CSF免疫猪组织淋巴细胞对PRRSV多肽刺激的应答特点

发布时间：2017-10-02 13:25

  本文关键词：CSF免疫猪组织淋巴细胞对PRRSV多肽刺激的应答特点

  更多相关文章： 猪繁殖与呼吸综合征 PRRSV特异性肽 IFN-γ IL-12 IL-10

【摘要】：猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种传染病,俗称“猪蓝耳病”。PRRSV于20世纪80年代末期,开始出现在世界养猪产业中并造成巨大经济损失,起源成迷。该病常与猪瘟(Classical swine fever,CSF)相伴感染于猪群中,提高发病率、病死率,致病机理更加复杂,防治不够完善。在PRRS的发病机制中,IFN-γ、IL-12主要参与免疫预防,IL-10则在免疫抑制中发挥重要作用。本试验以IFN-γ、IL-12、IL-10的分泌变化为指标,评价机体免疫应答的本质。试验选取不含有CSFV、PRRSV、PCV、PRV抗原和抗体的仔猪3头。待其达到4周龄时,接种兔源CSFV疫苗,再经过4周隔离饲养,于锁骨窝处进行前腔静脉采血,其血清用于检测有无病毒核酸的存在和免疫状况。每头仔猪通过外科手术方法分别提取四肢长骨骨髓(4种样本)、五处淋巴结(即腹股沟、肠系膜、颌下、肩前、肺门淋巴结共5种样本)、胸腺以及脾脏(每个脾脏分成脾头、脾中、脾尾即3种样本),进而将T淋巴细胞从上述器官每种样本中对应分离,做好标记,并通过流式细胞仪鉴定提取的细胞是否为T淋巴细胞。将每种样本所得原代T淋巴细胞转移至96孔板并分为两组,第一组T淋巴细胞在培养达到24h,向其中分别加入四种PRRSV特异性肽进行刺激,留出一孔作空白对照;第二组T淋巴细胞在培养至72h,向其中分别加入四种PRRSV特异性肽进行刺激,留出一孔作空白对照。四种PRRSV特异性肽分别为PRRSV-GP5(aa 100-108)、PRRSV-GP5(aa 96-104)、PRRSV-N(aa 106-114)、PRRSV-N(aa 49-57)分别简称G1肽、G2肽、N1肽和N2肽。所有试验、空白组样本在37℃恒温箱中刺激12h后,离心提取细胞上清液,应用Porcine ELISA检测试剂盒检测上清液中IFN-γ、IL-12以及IL-10的分泌量,通过SPSS统计软件,分析总结不同免疫器官在四种PRRSV特异性肽刺激下,IFN-γ、IL-12以及IL-10的变化规律。24h肽刺激组结果显示,骨髓中T淋巴细胞在四种PRRSV特异性肽刺激下,IFN-γ的含量经G1、G2、N1肽刺激后,与空白对照组相比,分泌量显著降低(P0.05);IL-12的含量经G1、G2、N1肽刺激后,与空白对照组相比,分泌量显著降低(P0.05);IL-10的含量经四种特异性肽刺激后,与空白对照组相比,分泌量均显著降低(P0.05)。淋巴结中T淋巴细胞在G1、N1、N2肽刺激下,IFN-γ的分泌量与空白对照组相比,降低,但不明显;IL-12的含量经G2、N1、N2肽刺激后,与空白对照组相比,分泌量显著升高(P0.05);IL-10的含量经四种特异性肽刺激后,与空白对照组相比,分泌量均显著降低(P0.05)。脾脏中T淋巴细胞在四种特异性肽刺激下,IFN-γ的分泌量与空白对照组相比,均显著降低(P0.05);IL-12的含量经四种特异性肽刺激后,分泌量与空白对照组相比,变化不明显;IL-10的含量经四种特异性肽刺激后,与空白对照组相比,分泌量均降低,尤其在N1、N2肽的刺激下,差异显著(P0.05)。胸腺中T淋巴细胞在四种特异性肽刺激下,IFN-γ的分泌含量与空白对照组相比,均显著升高(P0.05);IL-12的含量经G1、N1、N2肽刺激后,分泌量与空白对照组相比,显著降低(P0.05);IL-10的分泌含量在四种特异性肽刺激下,与空白对照组相比,均显著降低(P0.05)。72h肽刺激组结果显示,骨髓中T淋巴细胞在G1、G2、N2肽刺激下,IFN-γ的分泌含量与空白对照组相比,均显著升高(P0.05);IL-12的含量经N1、N2肽刺激后,与空白对照组相比,分泌量降低;IL-10的含量经四种特异性肽刺激后,变化不明显。淋巴结中T淋巴细胞在G1、G2、N1肽刺激下,IFN-γ的分泌含量与空白对照组相比,均降低,尤其在G2肽的刺激下,差异显著(P0.05);IL-12的含量,在四种特异性肽刺激后,与空白对照组相比,分泌量均显著降低(P0.05);IL-10的含量在G1、N1、N2肽刺激后,与空白对照组相比,分泌量均降低;脾脏中T淋巴细胞在G1、G2、N2肽刺激下,IFN-γ的分泌含量与空白对照组相比,升高,尤其在N2肽的刺激下,差异显著(P0.05);IL-12的分泌量在N2肽的刺激下,与空白对照组相比,显著升高(P0.05);IL-10的含量经四种特异性肽刺激后,与空白对照组相比,其分泌量显著降低(P0.05)。胸腺中T淋巴细胞在四种特异性肽刺激下,IFN-γ的分泌量与空白对照组相比,均显著升高(P0.05);IL-12的分泌含量,在G2、N1、N2肽的刺激下,与空白对照组相比,显著升高(P0.05);IL-10的含量经G1、N2肽刺激后,与空白对照组相比,其分泌量显著升高(P0.05)。结果表明,猪体在CSFV疫苗免疫成功,即猪瘟病毒抗体检测合格的情况下,机体对PRRSV特异性肽的刺激能产生较强的免疫应答。当CSF免疫状态良好时,四种特异性肽对于IL-10的分泌均有明显的抑制作用,阻碍免疫抑制的发生,有利于具有免疫促进性细胞因子的产生。同时,G1、G2和N1肽在影响IFN-γ、IL-12的分泌上作用不明显,而N2肽,在影响IFN-γ以及IL-12的分泌上,有促进二者分泌的趋势,但还需进一步验证。此外,免疫器官中的细胞因子是在离体培养条件下测得,从试验数据上可看出,当细胞培养达到24h,加入PRRSV特异性肽刺激T淋巴细胞,其分泌细胞因子的特点,要比在72h进行刺激作用更有规律性,有利于评价PRRSV特异性肽的作用效果,为PRRSV合成肽疫苗提供更为准确的参照数据。
【关键词】：猪繁殖与呼吸综合征 PRRSV特异性肽 IFN-γ IL-12 IL-10
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.28
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-15
• 引言15-16
• 第一篇 文献综述16-35
• 第1章 猪繁殖与呼吸综合征概述16-33
• 1 病原学特性17-19
• 2 流行病学特征19-22
• 3 临床症状22-24
• 4 发病机理24-26
• 5 PRRSV对免疫系统的影响26-30
• 6 防制30-33
• 第2章 免疫相关细胞因子的简介33-35
• 1 干扰素33
• 2 白细胞介素-1233
• 3 白细胞介素-1033-35
• 第二篇 研究内容35-71
• 第1章 CSF免疫猪组织淋巴细胞对PRRSV膜蛋白刺激的应答特点35-55
• 1 试验器材36-39
• 2 试验技术路线39
• 3 试验方法39-45
• 4 结果45-52
• 5 讨论52-54
• 6 小结54-55
• 第2章 CSF免疫猪组织淋巴细胞对PRRSV-N特异性肽刺激的应答特点55-71
• 1 试验器材56-59
• 2 试验技术路线59-60
• 3 试验方法60-62
• 4 结果62-68
• 5 讨论68-70
• 6 小结70-71
• 结论71-72
• 参考文献72-83
• 导师简介83-84
• 作者简介84-85
• 致谢85

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 郭敏;郎广平;梁志选;冯娇;孔惟博;任少敏;李彬;赵建增;高英杰;;PRRSV特异性肽对CSFV、PRRSV疫苗免疫猪后T淋巴细胞亚群的影响[J];中国兽医学报;2014年03期

2 付云云;单悦;郭敏;郎广平;白雪;梅林;屈雪琪;温涛;梁志选;杨举;罗胜军;邢海云;赵建增;高英杰;;猪瘟免疫猪接种PRRSV Nsp2Δ1882-2241弱毒疫苗后免疫应答及T细胞表型变化特征[J];中国兽医学报;2012年07期

3 白雪;付云云;单月;郭敏;郎广平;梅林;温涛;赵建增;梁志选;杨举;罗胜军;邢海云;高英杰;;不同CSF免疫状态下猪PRRS易感性及IFN-γ分泌细胞应答[J];中国兽医学报;2012年01期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 梅林;PRRSV免疫与实验感染猪血清细胞因子变化规律的研究[D];吉林大学;2012年

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本文编号：959868