山羊乳腺上皮细胞中5-HT对PTHrP的调控作用研究

发布时间：2017-10-05 08:30

  本文关键词：山羊乳腺上皮细胞中5-HT对PTHrP的调控作用研究

  更多相关文章： 5-HT PTHrP 钙平衡 山羊乳腺上皮细胞 低血钙症

【摘要】：处于哺乳期的母畜,由于泌乳对钙的需求增加,极易产生低血钙症。低血钙症是围产期经产奶山羊非常容易发生的代谢性疾病,给奶山羊产业带来极大损失。5-羟色胺(5-hydroxy tryptamine,5-HT)是最近发现的一种哺乳期骨转换的调节器。色氨酸羟化酶(Tryptophan Hydroxylase,TPH)是5-羟色胺生物合成中的限速酶,能够将色氨酸转化成5-羟色胺酸(5-hydroxytryptophan,5-HTP)。甲状旁腺相关肽(parathyroid hormone-related protein,PTHrP)是调控钙转运的关键基因,同时本实验室的研究也表明:PTHrP在山羊乳腺细胞中可以调控胞内Ca2+的浓度。最近对小鼠研究发现:5-HT可能是通过激活Hedgehog(Hh)信号通路来调控PTHrP表达。目前,针对奶山羊的5-HT、PTHrP以及Ca2+之间的调控作用尚未见报道。因此,本论文对奶山羊个体的血清和乳腺上皮细胞中5-HT和PTHrP的相关性,以及5-HT对钙转运关键基因(CaSR、PMCA1、SERCA2、SPCA1、SPCA2)表达丰度的影响进行了研究。获得以下主要结果:(1)通过采集并分离围产期萨能奶山羊血清,利用Elise试剂盒检测血清中5-HT、PTHrP和钙离子的浓度,统计分析三者之间的相关性。结果发现:与生产前相比,产后5-HT、PTHrP和Ca2+浓度上升(P0.05);5-HT与PTHrP浓度之间呈线性相关关系,线性回归方程为:y=0.12x+71(x为5-HT浓度;y为PTHrP浓度),相关系数r=0.86(P0.01);5-HT与Ca2+浓度之间存在曲线相关关系,曲线方程为:y=2.24(1-e-0.0006x)(x为5-HT浓度;y为Ca2+浓度),相关系数r=0.966(P0.01);PTHrP与Ca2+两者之间的存在曲线相关关系,曲线方程为:y=2.3(1-e-0.005x)(x为PTHrP浓度;y为Ca2+浓度),相关系数r=0.902(P0.01)。由此表明在围产期奶山羊血液中,5-HT浓度、PTHrP浓度和Ca2+浓度三者之间两两呈正相关关系。(2)分别用5-HTP和TPH1-Capra-1274处理山羊乳腺上皮细胞,检测PTHrP的mRNA和蛋白表达量。结果发现:5-HTP处理GMECs后,PTHrP的mRNA和蛋白表达量升高(P0.05);TPH1-Capra-1274处理GMECs后,PTHrP的mRNA和蛋白表达量降低(P0.05)。由此表明:5-HT分别在mRNA和蛋白水平上促进PTHrP表达。(3)分别用5-HTP和TPH1-Capra-1274处理山羊乳腺上皮细胞,在mRNA水平上检测钙转运基因(CaSR、PMCA1、SERCA2、SPCA1、SPCA2)的表达量。结果表明:5-HT促进CaSR表达,抑制PMCA1表达。5-HT对SPCA1、SPCA2和SERCA2的表达没有影响(P0.05)。总之,在围产期奶山羊的血清中,5-HT浓度、PTHrP浓度和Ca2+浓度两两之间存在正相关关系。与产前相比,产后山羊血清中5-HT、PTHrP浓度和Ca2+浓度显著升高。在GMECs中,5-HT在mRNA和蛋白水平上促进PTHrP基因表达。在GMECs中,5-HT在mRNA水平上促进CaSR表达,抑制PMCA1表达。
【关键词】：5-HT PTHrP 钙平衡 山羊乳腺上皮细胞 低血钙症
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S827
【目录】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 第一章 哺乳动物 5-HT和PTHrP基因以及钙平衡机制研究进展12-24
• 1.1 哺乳动物钙代谢平衡机制研究进展12-17
• 1.1.1 哺乳动物个体水平的钙平衡机制12-14
• 1.1.2 骨钙的调控与低血钙症机制14-15
• 1.1.3 乳腺上皮细胞中的钙分泌与运输机制15-17
• 1.2 PTHrP基因的研究进展17-19
• 1.2.1 PTHrP的功能17-18
• 1.2.2 PTHrP与血钙和乳钙代谢18-19
• 1.3 5-HT的研究进展19-23
• 1.3.1 5-HT的发现历史19
• 1.3.2 5-HT生物合成19-20
• 1.3.3 5-HT的受体类型20
• 1.3.4 5-HT的功能20-22
• 1.3.5 5-HT与PTHrP的关系22-23
• 1.4 本研究的目的和意义23-24
• 第二章 围产期奶山羊血清中 5-HT、PTHrP和Ca~(2+)浓度的相关性研究24-29
• 2.1 试验材料24
• 2.1.1 主要设备仪器24
• 2.1.2 试验材料及试剂24
• 2.2 试验方法24-25
• 2.2.1 5-HT测定方法24
• 2.2.2 PTHrP的测定方法24
• 2.2.3 钙的测定24-25
• 2.2.4 统计分析25
• 2.3 结果与分析25-27
• 2.3.1 围产期奶山羊在生产前后 5-HT、PTHrP和Ca~(2+)浓度的变化25-26
• 2.3.2 围产期奶山羊血清中 5-HT、PTHrP和Ca~(2+)浓度之间的相关性26-27
• 2.4 讨论27-28
• 2.5 小结28-29
• 第三章 奶山羊乳腺上皮细胞中 5-HT对PTHrP以及钙转运关键基因表达的调控29-40
• 3.1 试验材料29-30
• 3.1.1 主要仪器设备29
• 3.1.2 试验材料及试剂29
• 3.1.3 主要试剂配方29-30
• 3.2 试验方法30-32
• 3.2.1 山羊乳腺上皮细胞的培养30
• 3.2.2 奶山羊乳腺上皮细胞的不同处理30-31
• 3.2.3 细胞中总RNA的提取31
• 3.2.4 qRT-PCR31
• 3.2.5 Western Blot31
• 3.2.6 统计分析31-32
• 3.3 结果与分析32-38
• 3.3.1 有效干扰山羊TPH1基因的siRNA序列筛选32-33
• 3.3.2 5-HT对PTHrP的调控作用33-35
• 3.3.3 5-HT对钙转运关键基因表达的调控作用35-38
• 3.4 讨论38-39
• 3.5 小结39-40
• 结论40-41
• 参考文献41-46
• 附录46-51
• 缩略词及中英文对照51-52
• 致谢52-53
• 作者简介53

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王月影;朱河水;王艳玲;;乳腺上皮细胞的钙转运研究进展[J];江西农业学报;2008年06期

2 杨栎;李键;吴媛媛;田甜;毕琳;梁天宇;;绿色荧光蛋白基因在牦牛乳腺上皮细胞中表达的研究[J];西南民族大学学报(自然科学版);2009年03期

3 吴媛媛;李键;杨栎;毕琳;田甜;;牦牛乳腺上皮细胞的体外培养的研究[J];西南民族大学学报(自然科学版);2009年04期

4 弓超;王凌云;周欢敏;;牛乳腺上皮细胞体外分离和培养[J];动物医学进展;2011年07期

5 李吉霞;葛秀国;王文秀;张涌;;牛乳腺上皮细胞的分离培养[J];黑龙江畜牧兽医;2012年07期

6 符梅;熊显荣;高川;李宇;王树茂;李键;;麦洼牦牛乳腺上皮细胞系的建立及其生物学特性[J];西北农业学报;2012年11期

7 郝明超;刘r，

本文编号：975790