富硒酵母对玉米赤霉烯酮致染毒雄性小鼠生殖系统损伤保护作用的研究

发布时间：2017-10-06 04:23

  本文关键词：富硒酵母对玉米赤霉烯酮致染毒雄性小鼠生殖系统损伤保护作用的研究

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【摘要】：目的与背景：玉米赤霉烯酮(zearalenone,以下简称ZEN),对动物的生殖繁育影响甚大,会引起雄性动物的睾丸萎缩及精子质量的下降等。硒是机体重要的必需微量元素之一,能够提高机体抗氧化损伤能力；此外硒对机体有害物质如曲霉毒素、重金属还具有解毒、排毒的功能。富硒酵母是经生物工程技术研制而成的一种富含微量元素硒的生物制剂,与无机硒相比其生理活性更高及更安全。因此富硒酵母已经成为当前机体抗氧化损伤及解毒的研究热点。但是富硒酵母对玉米赤霉烯酮致染毒雄性小鼠生殖系统损伤保护作用目前尚不清楚。因此本课题拟采用富硒酵母防治ZEN致染毒的雄性小鼠,探讨硒对其生殖毒性的保护作用及其保护机制的研究,该研究为ZEN引起的雄性生殖毒性的预防和治疗提供新的线索和思路。方法：每天富硒酵母灌胃1h后再灌胃ZEN,灌胃28d后,颈椎脱臼法处死。通过光镜下观察附睾和睾丸结构形态学变化及小鼠血清中睾酮(T)的含量,探讨富硒酵母对ZEN致雄性小鼠睾丸和附睾毒性的影响；其次通过对精子形态、精子畸形率、精子浓度和精子活动度、活动方式的观察和统计探讨硒对ZEN致雄性小鼠精子毒性的影响；通过检测睾丸抗氧化指标SOD、MDA、GSH-Px探讨富硒酵母对ZEN致雄性小鼠氧化应激的影响；通过检测凋亡基因相关蛋白Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达水平变化探讨富硒酵母对ZEN致小鼠睾丸生精细胞凋亡的。结果：1.富硒酵母对ZEN致雄性小鼠睾丸和附睾毒性的影响单独ZEN灌胃(40mg/kg)小鼠28d后,睾丸曲精小管与基底细胞分离,生精细胞与支持细胞分离,生精细胞排列稀疏紊乱,管腔内观察到大量稀疏的生精细胞；附睾与体重的比值显著降低(P0.05),说明ZEN对小鼠睾丸和附睾的形态结构具有损伤作用。每天给予0.4mg/kg富硒酵母配合ZEN灌胃小鼠28d后,睾丸及附睾中的细胞与单独ZEN处理组相比,细胞排列较为整齐紧密,生精细胞脱落数量减少,附睾指数有明显升高(P0.05),说明大剂量的富硒酵母能够缓解ZEN对睾丸和附睾结构的损伤作用。单独灌胃40mg/kg.d ZEN 28d后小鼠血清中睾酮含量显著下降,说明ZEN抑制小鼠血清中睾酮的合成。灌胃ZEN配合不同剂量富硒酵母解药处理后,对小鼠血清中睾酮的合成影响不大2.富硒酵母对ZEN致雄性小鼠精子毒性的影响单独灌胃ZEN 40mg/kg.d 28 d后,小鼠精子出现明显畸形状态,精子浓度、精子活力与对照组相比有显著的下降(P0.05),说明ZEN对精子具有较强的毒性作用。灌胃富硒酵母配合ZEN小鼠28d后,大剂量(0.4mg/kg)、中剂量(0.2mg/kg)富硒酵母都可明显升高精子浓度,降低精子畸形率、提高精子活动参数(P0.05)。试验结果表明灌胃0.2mg/kg、0.4mg/kg富硒酵母能够抑制ZEN对精子的毒性作用。3.探究富硒酵母对ZEN致雄性小鼠抗氧化应激的影响单独灌胃0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.4mg/kg富硒酵母后,小鼠睾丸组织中抗氧化指标GSH-Px的活性、SOD活性与对照组相比有了显著得提高(P0.05)说明富硒酵母能够增强机体的抗氧化能力。每天灌胃富硒酵母(0.4 mg/kg)1h后再灌胃ZEN (40mg/kg.d),小鼠MDA的含量相对于单独灌胃ZEN组相比有明显的下降(P0.05),说明灌胃ZEN配合0.4 mg/kg富硒酵母解药处理,能有效地提高机体对ZEN的抗氧化氧化应激反应；而灌胃ZEN配合0.1mg/kg、0.2mg/kg富硒酵母解药处理,机体对ZEN的抗氧化能力影响差异不显著,说明灌胃0.1mg/kg、0.2mg/kg富硒酵母对ZEN氧化应激毒性无显著影响(P0.05),试验证明富硒酵母对缓解ZEN睾丸氧化应激呈剂量依赖性。4.探究富硒酵母对ZEN致雄性睾丸组织细胞凋亡的影响单独灌胃ZEN 40mg/kg.d28天后,小鼠睾丸组织中促凋亡基因Bax、Caspase-3 mRNA相对表达水平显著提高(P0.05),抗凋亡基因Bcl-2 mRNA相对表达水平显著的下降(P0.05)。每天灌胃富硒酵母(0.4mg/kg) 1h后再灌胃ZEN 40(mg/kg.d),促凋亡基因Bax、Caspase-3 mRNA相对表达水平与单独灌胃ZEN组相比明显降低(P0.05),结果表明灌胃ZEN配合大剂量(0.4mg/kg)富硒酵母解药处理,能有效地抑制ZEN引起睾丸组织细胞的凋亡；此外单独灌胃不同剂量的富硒酵母后,Bcl-2 mRNA相对表达水平显著得到提高(P0.05),说明富硒酵母能够增强机体的抗凋亡能力。灌胃ZEN配合不同剂量富硒酵母解药处理,机体的抗凋亡能力得到有效提高。
【关键词】：富硒酵母 玉米赤霉烯酮 氧化应激损伤 生殖毒性保护
【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S859.87
【目录】：

• 摘要9-11
• Abtrast11-14
• 前言14-20
• 1.1 玉米赤霉烯酮的概述14-15
• 1.2 硒与富硒酵母的简介15
• 1.3 氧化应激损伤的简介15-16
• 1.4 与雄性生殖系统相关激素的简介16
• 1.5 研究进展16-18
• 1.6 研究的目的和意义18-19
• 1.7 研究的主要思路19-20
• 第一章 富硒酵母对ZEN致雄性小鼠睾丸和附睾毒性的影响20-29
• 1.1 材料和方法20-22
• 1.1.1 试验动物20
• 1.1.2 主要药品与试剂20
• 1.1.3 主要仪器20-21
• 1.1.4 主要试剂的配置21
• 1.1.5 试验动物给药与染毒21
• 1.1.6 睾丸与附睾脏器指数检测21
• 1.1.7 光学倒置显微镜观察小鼠睾丸结构形态学变化21-22
• 1.1.8 放射免疫分析法(RIA)测定小鼠血清中睾酮(T)的含量22
• 1.1.9 数据统计分析22
• 1.2 试验结果22-26
• 1.2.1 硒对ZEN致雄性小鼠睾丸和附睾脏器指数的影响22-24
• 1.2.2 硒对ZEN致雄性小鼠睾丸形态结构的影响24-25
• 1.2.3 硒对ZEN致雄性小鼠睾酮合成的影响25-26
• 1.3 讨论26-28
• 1.4 小结28-29
• 第二章 富硒酵母对ZEN致雄性小鼠精子毒性的影响29-36
• 2.1 材料与方法29-30
• 2.1.1 试验动物29
• 2.1.2 主要药品和试剂29
• 2.1.3 主要仪器29
• 2.1.4 精子畸形率的检查29
• 2.1.5 精子浓度和精子活力的检测29-30
• 2.1.6 数据统计分析30
• 2.2 试验结果30-33
• 2.2.1 硒对ZEN致雄性小鼠精子畸形率的影响30-31
• 2.2.2 硒对ZEN致雄性小鼠精子浓度和活力的影响31-33
• 2.3 讨论33-35
• 2.4 小结35-36
• 第三章 富硒酵母对ZEN致雄性小鼠抗氧化应激的影响36-42
• 3.1 材料与方法36-38
• 3.1.1 试验动物36
• 3.1.2 主要药品和试剂36
• 3.1.3 主要仪器36-37
• 3.1.4 睾丸组织的取材和匀浆37
• 3.1.5 睾丸组织蛋白定量检测37
• 3.1.6 丙二醛(MDA)含量测定37
• 3.1.7 总超氧化物歧化酶(SOD)活力测定37-38
• 3.1.8 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性检测38
• 3.1.9 数据统计分析38
• 3.2 试验结果38-40
• 3.2.1 硒对ZEN致雄性小鼠抗氧化应激的影响38-40
• 3.3 讨论40-41
• 3.4 小结41-42
• 第四章 富硒酵母对ZEN致雄性小鼠睾丸细胞凋亡的影响42-48
• 4.1 材料与方法42-45
• 4.1.1 试验动物42
• 4.1.2 主要药品与试剂42
• 4.1.3 主要仪器42
• 4.1.4 主要试剂的配制42-43
• 4.1.5 样品RNA的提取43
• 4.1.6 样品RNA的检测43
• 4.1.7 样品RNA的反转录43
• 4.1.8 荧光定量PCR引物合成43-44
• 4.1.9 荧光定量PCR44
• 4.1.10 数据统计分析44-45
• 4.2 试验结果45-46
• 4.2.1 小鼠睾丸组织Bax、Caspase-3和Bal-2 mRNA表达情况45-46
• 4.3 讨论46-47
• 4.4 小结47-48
• 结论48-49
• 参考文献49-53
• 致谢53

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本文编号：980705