不同因素对牛胆汁中甘氨胆酸提取的影响及甘氨胆酸HPLC的方法学研究

发布时间：2017-10-06 20:29

  本文关键词：不同因素对牛胆汁中甘氨胆酸提取的影响及甘氨胆酸HPLC的方法学研究

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【摘要】：本研究旨在考察采用乙醇沉淀法及柱色谱法从牛胆汁中提取甘氨胆酸(Glycocholic acid, GCA)的过程中,流速、盐析添加NaCl的量、pH值等因素对甘氨胆酸提取量及纯度的影响,以便建立一条更加优化的从牛胆汁中提取甘氨胆酸的工艺技术路线。并且初步建立高效液相色谱法检测甘氨胆酸的方法,为甘氨胆酸的检测提供一个新的、高效的检测方案。试验采用四因素三水平的正交试验设计方案,按照正交设计表L9(34)研究和分析了从牛胆汁中提取甘氨胆酸的过程中,流速、盐析添加NaCl的量、萃取时的pH值以及流动相比例对甘氨胆酸纯度以及提取量的影响。正交试验结果表明,从牛胆汁中提取甘氨胆酸的最优组合工艺为在容积为200 mL的层析柱做分离纯化,每柱层析55 g硅胶作为固定相,氯仿和正丁醇的混合溶剂作为流动相进行洗脱,每柱装样量为100 mL牛胆汁,流速为水平1,pH值为2,流动相为比例3,盐析添加NaCl的量为水平1,可从每100 mL牛胆汁中提取甘氨胆酸0.3104 g,纯度为96.25%,回收率在65%以上。利用薄层层析法、薄层色谱法以及高效液相色谱法对甘氨胆酸进行了定性、定量分析。建立的检测甘氨胆酸的高效液相色谱法的检测条件为：波长210 nm,柱温30℃,流动相为乙腈：水=35：65,流速0.5 mL/min,经方法学研究初步考察,方法稳定可行,可用于甘氨胆酸的检测。结论,本试验利用正交试验设计筛选出的最优组合工艺提取出的甘氨胆酸量较大、纯度高、方法简便、成本低廉且生产周期短。建立的高效液相色谱法检测甘氨胆酸的方法稳定可靠。
【关键词】：甘氨胆酸 正交试验设计 提取工艺 高效液相色谱法 方法学研究
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.23
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-9
• 缩略语表9-10
• 1 引言10-18
• 1.1 胆汁的概况10-11
• 1.2 胆汁酸的代谢及其生理功能11-12
• 1.2.1 胆汁酸的代谢11-12
• 1.2.2 胆汁酸的生理功能12
• 1.3 甘氨胆酸的研究概况12-16
• 1.3.1 甘氨胆酸的药学研究12-15
• 1.3.2 甘氨胆酸的药理作用15-16
• 1.4 目的和意义16-18
• 2 试验部分18-25
• 2.1 试验材料18-19
• 2.1.1 药品与试剂18
• 2.1.2 主要仪器设备18-19
• 2.2 研究内容与方法19-25
• 2.2.1 不同因素对牛胆汁中提取甘氨胆酸的影响19-21
• 2.2.2 甘氨胆酸定性、定量分析21-22
• 2.2.3 牛胆汁中提取甘氨胆酸的正交试验22-23
• 2.2.4 甘氨胆酸HPLC的色谱条件23-24
• 2.2.5 甘氨胆酸HPLC的方法学研究24-25
• 3 试验结果25-35
• 3.1 四种因素对牛胆汁中GCA提取量影响的研究25-29
• 3.1.1 对照品GCA的标准曲线25
• 3.1.2 薄层层析结果25-26
• 3.1.3 薄层色谱结果26-27
• 3.1.4 HPLC检测结果27-28
• 3.1.5 牛胆汁中GCA提取量的结果28
• 3.1.6 牛胆汁中GCA提取量的直观法分析结果28-29
• 3.2 四种因素对牛胆汁中提取GCA的纯度影响29-31
• 3.2.1 牛胆汁中GCA的纯度结果29-30
• 3.2.2 牛胆汁中GCA纯度的直观法分析结果30-31
• 3.3 优化组合的筛选结果31
• 3.4 不同组合工艺提取甘氨胆酸的对比试验结果31-32
• 3.5 提取工艺回收率结果32
• 3.6 甘氨胆酸高效液相色谱法的方法学研究结果32-35
• 3.6.1 色谱条件32-33
• 3.6.2 方法学研究33-35
• 4 讨论35-37
• 5 结论37-38
• 致谢38-39
• 参考文献39-43
• 作者简介43

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本文编号：984888