过敏性紫癜血清IgA1刺激脐静脉内皮细胞分泌炎症介质的实验研究

发布时间：2018-03-18 04:16

  本文选题：过敏性紫癜　切入点：人脐静脉内皮细胞　出处：《安徽医科大学》2012年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的 过敏性紫癜（HSP）是儿童期最常见的系统性小血管炎。尽管已知血管内皮损伤是HSP主要病理变化，但其血管内皮损伤机制尚不清楚。本研究通过观察HSP血清及血清IgA1刺激下人脐静脉内皮细胞（HUVECs）分泌炎性细胞因子水平及HUVECs中细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和核因子-κB（NF-κB）相关基因及蛋白表达的变化，初步探讨儿童过敏性紫癜血清IgA1与血管内皮损伤的关系及血管内皮细胞损伤的分子机制。 方法 1.血清采集及IgA1的提取： 本院儿科住院确诊为HSP的急性期患儿10例及10例健康体检儿童均于清晨空腹抽取外周静脉血5ml，分离血清；Jacalin亲和层析法提取血清IgA1。 2.实验方法： 采用体外细胞培养方法，实验分三组观察：HSP组，正常对照组，空白对照组。 HSP组分别用患儿血清及患儿血清IgA1与HUVECs共培养；正常对照组分别用正常儿童血清及正常儿童血清IgA1与HUVECs共培养；空白对照组用无血清培养基与HUVECs共培养。培养12h后分别检测各组上清液炎性细胞因子水平。 采用MTT比色法检测各组IgA1刺激下HUVECs吸光值，观察不同浓度IgA1刺激HUVECs增殖情况。 实时荧光定量聚合酶链反应（Real time PCR）和蛋白质印记技术（Westernblot）检测IgA1刺激下HUVECs中NF-κB和ICAM-1mRNA及蛋白表达。 结果 1. HSP患儿血清及血清IgA1分别与HUVECs共培养12h后，HSP组上清液IL-8、TNF-α和NO水平均明显高于正常对照组和空白对照组（P0.05）； 2.血清IgA1刺激HUVECs增殖实验中，正常对照组和HSP组IgA1均可刺激HUVECs增殖（p＜0.05）；随着IgA1浓度的增加，两组HUVECs增殖程度均有相应增高趋势；在IgA1相同浓度下，与正常对照组相比，HSP组IgA1刺激HUVECs增殖程度更明显（p＜0.05）。 3.HSP组血清IgA1刺激下HUVECs NF-κB和ICAM-1mRNA表达量明显高于正常对照组及空白对照组（分别P＜0.05，，P＜0.01），且HSP组两者的蛋白表达量也明显高于正常对照组和空白对照组（P＜0.01）。 结论 1. HSP急性期患儿血清IgA1可诱导体外培养的HUVECs活化并分泌炎性介质。 2. IgA1可能通过激活NF-κB通路,上调血管内皮细胞炎性介质的表达而导致内皮细胞损伤。
[Abstract]:Purpose. Henoch-Schonlein purpura (HSP) is the most common systemic vasculitis in children. However, the mechanism of vascular endothelial injury is not clear. In this study, we observed the levels of inflammatory cytokines in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) stimulated by HSP serum and serum IgA1, and the intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) and nuclear factor- 魏 B (NF- 魏 B) related units in HUVECs. Because of changes in protein expression, To explore the relationship between serum IgA1 and vascular endothelial injury in children with Henoch-Schonlein purpura and the molecular mechanism of vascular endothelial cell injury. Method. 1. Serum collection and IgA1 extraction:. Ten children with acute HSP diagnosed in pediatrics and 10 healthy children were collected from peripheral venous blood on an empty stomach in the morning, and serum IgA1 was extracted by affinity chromatography. 2. Experimental methods:. The cells were cultured in vitro and divided into three groups: the control group, the normal control group and the blank control group. The HSP group was co-cultured with serum IgA1 and HUVECs, and the control group was co-cultured with IgA1 and HUVECs in normal children's serum and normal children's serum, respectively. The blank control group was co-cultured with serum-free medium and HUVECs. After 12 hours of culture, the levels of inflammatory cytokines in supernatant of each group were measured. MTT colorimetric assay was used to detect the light absorption of HUVECs stimulated by IgA1, and the proliferation of HUVECs stimulated by different concentrations of IgA1 was observed. Real time PCR and Western blot were used to detect the expression of NF- 魏 B, ICAM-1mRNA and protein in HUVECs stimulated by IgA1. Results. 1. The levels of IL-8 TNF- 伪 and no in the supernatant of HSP group were significantly higher than those in the normal control group and the blank control group (P 0.05) after 12 hours of co-culture of serum and serum IgA1 with HUVECs. 2. In the experiment of HUVECs proliferation stimulated by serum IgA1, IgA1 in normal control group and HSP group could stimulate HUVECs proliferation P < 0.05, and with the increase of IgA1 concentration, the HUVECs proliferation degree of both groups had a corresponding increase trend. Compared with the normal control group, the proliferation of HUVECs stimulated by IgA1 in HSP2 group was significantly higher than that in HSP2 group (P < 0.05). 3. The expression of HUVECs NF- 魏 B and ICAM-1mRNA in HSPgroup was significantly higher than that in normal control group and blank control group (P < 0.05 P < 0.01), and the protein expression in HSP group was significantly higher than that in normal control group and blank control group (P < 0.01). Conclusion. 1. Serum IgA1 could induce the activation of HUVECs and secretion of inflammatory mediators in acute phase of HSP. 2. IgA1 may induce endothelial cell injury by activating NF- 魏 B pathway and up-regulating the expression of inflammatory mediators in vascular endothelial cells.
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R725.5

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本文编号：1627949