EPO对窒息新生鼠内质网应激相关蛋白GRP78、CHOP及其介导的心肌细胞凋亡的影响

发布时间：2018-03-21 00:54

  本文选题：促红细胞生成素　切入点：窒息　出处：《南昌大学》2013年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的： 1．采用窒息新生鼠模型，观察新生鼠窒息后心肌损伤及心肌细胞凋亡情况。 2．研究新生鼠缺氧缺血性心肌损伤过程中是否存在ERS和CHOP凋亡通路的激活及其与心肌细胞凋亡的关系。 3．研究EPO对窒息新生鼠缺氧缺血性心肌损伤以及心肌组织GRP78、CHOP蛋白表达的影响，探讨其可能的作用机制。 方法： 1．实验分组及新生鼠常压窒息模型制作：120只新生7日龄SD大鼠按完全随机分组分为以下3组（每组n=40）：假手术组、窒息组、EPO组；每组再分为2h、6h、12h、24h、48h五个时间点（每时间点8只）。窒息组和EPO组制备新生鼠常压窒息模型，假手术组仅进行模拟常压窒息过程，不塞瓶塞、复氧，EPO组于造模完成后立即给予rhEPO10ml/kg（500U/ml）腹腔注射，其余两组接受同剂量的生理盐水（0.9%）。各组在造模完成后分别于各时间点取血及心肌组织，进行各项指标的检测。 2．观察指标：血清心肌酶CK、LDH水平；HE染色观察心肌组织病理形态学改变；TUNEL法定性和定量检测心肌细胞凋亡；免疫组织化学染色法测定心肌组织GRP78、CHOP蛋白表达。 3．数据分析：采用SPSS19.0软件进行统计分析，实验数据以均数±标准差（x±ｓ）表示，组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)，两两比较采用SNK-q检验，P0.05表示差异有统计学意义，P0.01表示差异显著。心肌组织CHOP表达与心肌细胞凋亡指数的相关分析，采用Pearson相关分析。 结果： 1．血清心肌酶CK水平：与假手术组比较，窒息组、EPO组各时间点CK值均显著升高(P0.01)，2h开始升高，6h、12h、24h、48h逐渐增加；与窒息组比较，EPO组各时间点CK值均显著下降(P0.01)。 2．血清心肌酶LDH水平：与假手术组比较，窒息组、EPO组各时间点LDH值均显著升高(P0.01)，2h开始升高，，6h、12h、24h、48h逐渐增加；与窒息组比较，EPO组各时间点LDH值均显著下降(P0.01)。 3．心肌组织病理改变：与假手术组比较，窒息组各时间点心肌细胞排列紊乱，细胞核不规则，呈浓缩状，心肌间质充血水肿，有炎性细胞浸润；EPO组心肌细胞排列紊乱、间质充血水肿、炎性细胞浸润均比同时间点窒息组减轻。 4．心肌细胞凋亡荧光显色：假手术组仅见少量凋亡细胞荧光显色；窒息组凋亡细胞明显增多；EPO组凋亡细胞较窒息组减少，但多于假手术组。 5．心肌细胞凋亡指数（apoptotic index，AI）结果分析：与假手术组比较，窒息组、EPO组各时间点AI均显著升高(P0.01)，2h开始升高，6h、12h、24h、48h逐渐增加；与窒息组比较，EPO组各时间点AI均显著下降(P0.01)。 6．心肌组织GRP78蛋白表达：与假手术组比较，窒息组、EPO组各时间点GRP78蛋白表达均显著升高(P0.01)，2h开始升高，12h达高峰，48h仍高于正常；与窒息组比较，EPO组各时间点GRP78蛋白表达均显著下降(P0.01)。 7．心肌组织CHOP蛋白表达：与假手术组比较，窒息组、EPO组各时间点CHOP蛋白表达均显著升高(P0.01)，2h开始升高，24h达高峰，48h仍高于正常；与窒息组比较，EPO组各时间点CHOP蛋白表达均显著下降(P0.01)。 8．心肌组织CHOP表达与AI之间进行相关性分析：心肌组织CHOP表达与心肌细胞凋亡指数于窒息后2h、6h、12h、24h四个时间点分别成正相关，于48h无直线相关关系。 结论： 1．新生大鼠窒息后早期心肌细胞即可出现一定程度的损伤及凋亡，且在48h内持续升高。 2．新生鼠窒息所致缺氧缺血性心肌损伤过程中存在ERS及CHOP凋亡信号通路的激活。 3．窒息新生鼠心肌细胞凋亡与CHOP凋亡信号通路的激活有关。 4．EPO通过减轻ERS、干扰CHOP凋亡信号通路、减少心肌细胞凋亡，从而发挥对新生鼠缺氧缺血性心肌损伤的保护作用。
[Abstract]:Objective:
1. the neonatal rat model of asphyxia was used to observe the myocardial injury and apoptosis of neonatal rats after asphyxia.
2. whether there is the activation of ERS and CHOP apoptosis pathway and the relationship with cardiomyocyte apoptosis during hypoxic and ischemic myocardial injury in neonatal rats.
3. to study the effect of EPO on the hypoxic and ischemic myocardial injury and the expression of GRP78 and CHOP protein in neonatal rats with asphyxia, and to explore the possible mechanism of its action.
Method锛

本文编号：1641551