EV71诱导外周血单个核细胞合成释放IP-10信号分子机制的研究

发布时间：2018-04-04 04:20

  本文选题：肠道病毒71型　切入点：外周血单个核细胞　出处：《青岛大学》2012年博士论文

【摘要】：手足口病是由肠道病毒感染引起的急性传染病,研究表明重症病例,大部分为肠道病毒71型(enterovirus71, EV71)感染所致,EV71感染可以引起手足口病、疱疹性咽峡炎、无菌性脑膜炎、脑炎、脊髓灰质炎样的麻痹性疾病及神经源性肺水肿等多种与神经系统相关的疾病,而且可以同时侵犯免疫器官和免疫细胞,从而造成对免疫系统的损害,引起全身多器官的免疫炎性反应。目前,针对这种病毒诱导的免疫损伤尚没有特效的药物治疗,临床上采用糖皮质激素治疗可在一定程度上减轻炎症、缓解症状,但是激素治疗的同时也抑制了机体的免疫反应,不仅影响了病毒的清除,还可能促进了条件致病菌的继发感染。研究发现：EV71病毒感染后可诱导机体产生以γ-IFN可诱导的趋化因子IP-10(interferon-gamma inducible protein10)为代表的炎症瀑布效应,进而刺激多种炎症细胞活化,在EV71介导的弥漫性脑损伤与免疫器官损伤而造成免疫功能抑制中起着重要作用。本研究旨在发现EV71介导的急性免疫损伤的信号转导分子机制,本课题包括两部分。 第一部分EV71病毒感染PBMC模型的建立及培养上清中IP-10的检测 目的成功建立EV71病毒直接感染人外周血单个核细胞PBMC (human peripheral blood mononuclear cells)的体外模型,为进一步从外周血单个核细胞分子生物学的角度探讨EV71感染后免疫损伤阶段的发病机理奠定基础。并研究EV71标准毒株作用于外周血单个核细胞后对趋化因子IP-10生成的影响。 方法以EV71病毒感染外周血单个核细胞,观察感染后的细胞病变,采用逆转录聚合酶链方法(RT-PCR)扩增出EV71的特异性条带。用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测趋化因子干扰素诱导蛋白10(IP-10)的表达。 结果外周血单个核细胞感染EV71病毒后,逐步出现了细胞病变,RT-PCR可以扩增出EV71的特异性条带。基础状态下,不能检出IP-10的存在；在100倍半数感染量(100TCID50) EV71标准毒株及重组人[FN-γ (500U/ml)刺激下,人外周血单个核细胞PBMC均可检测到高水平的IP-10表达(分别为112.89±12.10；80.06±6.23,)。 结论EV71病毒能够感染PBMC,并引起明显的形态学改变。EV71病毒感染可以使趋化因子IP-10水平明显增高,能诱导PBMC合成释放IP-10。 第二部分研究EV71诱导PBMC合成释放IP-10(interferon-gamma inducible protein10)的信号分子机制 目的探讨EV71感染对PBMC的作用及主要信号转导通路的激活,寻找介导免疫损伤的信号分子节点。 方法RT-PCR法检测JAK-STAT信号通路介导的关键转录因子-干扰素调节因子-1(IRF-1)、IP-10基因的表达以及WESTERN-BLOT法检测磷酸化信号传导和转录激活子(P-STAT1)的表达。 结果RT-PCR结果证实：EV71病毒诱导了PBMC的IRF-1、IP-10基因的表达；WESTERN-BLOT方法结果表明：EV71病毒作用于PBMC诱导了STAT1的磷酸化。 结论EV71病毒感染PBMC可以使趋化因子IP-10水平明显增高,IP-10在EV71感染后导致的急性免疫损伤中起重要作用。EV71通过激活JAK-STAT信号转导通路诱导IP-10在PBMC的生成,使被EV71感染的PBMC中大量生成和释放IP-10。STAT1在EV71感染PBMC激活JAK-STAT信号通路中起着极其重要的作用。EV71通过激活的STAT1启动IRF-1转录从而启动IP-10转录,EV71诱导的JAK-STAT信号通路的激活是EV71感染引起相关免疫损伤的发病机制之一。
[Abstract]:The present study shows that EV71 infection can induce the immune response of human body , such as hand - foot - mouth disease , herpes angina , aseptic meningitis , encephalitis , poliomyelitis - like paralysis and neurogenic pulmonary edema .

First part EV71 virus infection PBMC model establishment and culture supernatant IP - 10 detection

Objective To establish an in vitro model of human peripheral blood mononuclear cells ( PBMC ) from peripheral blood mononuclear cells ( PBMC ) of human peripheral blood mononuclear cells ( PBMC ) .

Methods Peripheral blood mononuclear cells were infected with EV71 , and the specific bands of EV71 were amplified by reverse transcription polymerase chain reaction ( RT - PCR ) . The expression of chemokine interferon inducible protein 10 ( IP - 10 ) was detected by two - step sandwich enzyme linked immunosorbent assay ( ELISA ) .

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本文编号：1708340