乌司他丁对脓毒症幼鼠肺损伤的保护作用及其机制研究

发布时间：2018-04-19 14:52

本文选题：乌司他丁 + 脓毒症　；参考：《南昌大学》2015年硕士论文

【摘要】：目的:1.采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)法制备脓毒症幼鼠模型,观察脓毒症致急性肺损伤(ALI)程度及炎症介质肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、高迁移率族蛋白-1(HMGB-1)释放情况。2.研究幼鼠脓毒症致ALI过程中是否存在JAK-STAT信号通路的激活及其与HMGB-1释放的关系。3.研究乌司他丁(UTI)对脓毒症致ALI可能的保护作用机制。方法:1.实验分组:128只4周龄雄性SD大鼠按完全随机分组分为以下4组(每组n=32):正常对照组(Ctrl组)、假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)、乌司他丁治疗组(UTI组);每组再分为四个时间点:6 h、12 h、24 h、48 h。Ctrl组不做其他处理,仅0 h、24 h经尾静脉注射同剂量NS(5 ml/kg);Sham组仅行开腹手术,并翻动盲肠后关腹,不结扎和穿刺盲肠,术后立即经股内侧皮下注射NS(30ml/kg)进行液体复苏,并于0 h、24 h经尾静脉注射同剂量NS(5 ml/kg)以代替UTI;CLP组开腹行CLP术,术毕立即经股内侧皮下注射NS(30 ml/kg)进行液体复苏,并于0 h、24 h经尾静脉注射同剂量NS(5 ml/kg)以代替UTI;UTI组开腹行CLP术,术毕立即股内侧皮下注射NS(30 ml/kg)进行液体复苏,并于0 h、24 h经尾静脉注射UTI(用量50 mg/kg,用NS配制成注射液用量相当于5 ml/kg)。2.标本收集:各组幼鼠于6 h、12 h、24 h、48 h四个时间点分别迅速开胸,心脏取血用于ELISA测定血清TNF-a。采集肺组织标本,取右肺下叶,置于滤纸吸干表面水分后称湿重,再置于60℃恒温箱烘烤48 h,至恒重后称干重,计算肺湿/干重比(W/D);将左肺组织置于4%中性甲醛中固定后石蜡包埋,用于HE和免疫组化染色。3.观察指标:HE染色、光镜下观察肺脏组织病理形态学变化;肺W/D测定;ELISA法测定血清TNF-α水平;免疫组织化学染色法测定肺脏组织HMGB-1、P-JAK2、P-STAT3蛋白表达。结果1.一般表现:CLP组幼鼠术后出现病态表现:嗜睡,活动、摄食减少,口腔眼角分泌物增多,呼吸加快、发绀。剖腹可见腹腔积有血性渗出液伴恶臭,盲肠肿胀、变黑;UTI组病态表现较轻;Ctrl、Sham组无以上病态表现。2.肺W/D测定:与Ctrl组、Sham比较,CLP组、UTI组各时间点肺W/D升高(P0.01);与CLP组相比较,UTI组肺W/D降低(P0.01);3.肺脏组织病理形态变化:与Ctrl组、Sham组比较,CLP组病理改变明显,肺泡间隔增宽,肺泡腔充血水肿,肺间质有炎性细胞浸润;UTI组肺泡间隔稍增宽,肺泡充血水肿、间质炎性细胞浸润均比同时间点CLP组减轻。4.血清TNF-α水平:与Ctrl组、Sham组比较,CLP组与UTI组各时间点TNF-α水平升高(P0.01),6 h升高,12 h达高峰,之后递减但仍高于Ctrl组、Sham组;与CLP组相比较,UTI组血清TNF-a含量显著降低(P0.01)。5.肺脏组织HMGB-1蛋白表达:与Ctrl组、Sham组比较,CLP组与UTI组各时间点肺组织HMGB-1蛋白表达显著升高(P0.01),6 h开始升高,且于6-24 h内随时间推移蛋白表达显著增多,持续至48 h;与CLP组比较,UTI组各时间点HMGB-1蛋白表达均显著下降(P0.01)。6.肺脏组织P-JAK2、P-STAT3蛋白表达:与Ctrl组、Sham组比较,CLP组与UTI组各时间点肺组织P-JAK2、P-STAT3蛋白表达显著升高(P0.01),6h-24h逐渐升高,48 h有所下降但仍高于Ctrl组、Sham组。与CLP组比较,UTI组各时间点P-JAK2蛋白表达均显著下降(P0.01)。7.肺脏组织P-JAK2、P-STAT3表达与HMGB-1之间进行相关性分析:肺脏组织P-JAK2、P-STAT3蛋白表达分别与HMGB-1蛋白表达于CLP后6 h、12h、24 h、48 h四个时间点成正相关。结论:1.本实验采用CLP法成功复制脓毒症致ALI幼鼠动物模型。2.炎症介质TNF-α、HMGB-1大量释放参与脓毒症ALI的发病过程。3.脓毒症ALI发病过程存在JAK-STAT信号转导通路的激活。4.UTI对脓毒症ALI具有一定保护作用,其可能机制为:1)通过抑制JAK-STAT信号转导通路活化而下调其下游炎症介质如TNF-α、HMGB-1生成,减轻其毒性作用,从而防止脓毒症致ALI的发生与发展;2)直接抑制炎症介质TNF-α、HMGB-1表达,减轻其毒性作用,起到组织保护作用。结果:
[Abstract]:Objective : 1 . To study the protective mechanism of acute lung injury ( ALI ) and tumor necrosis factor - 伪 ( TNF - 伪 ) and high mobility group protein - 1 ( HMGB - 1 ) by cecal ligation and puncture ( CLP ) . The pathological changes of serum TNF - a were measured by ELISA . Compared with control group and Sham group , the expression of HMGB - 1 protein in UTI group increased significantly ( P0.01 ) . Compared with the control group and Sham group , the expression of TNF - a in UTI group increased significantly ( P0.01 ) . 4 . UTI can inhibit the occurrence and development of ALI by inhibiting the activation of JAK - STAT signal transduction pathway , thus preventing the occurrence and development of ALI by inhibiting the activation of JAK - STAT signal transduction pathway , and 2 ) directly inhibiting the expression of TNF - 伪 and HMGB - 1 in inflammatory mediators , reducing its toxic effect and protecting the tissue .

【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R720.597

【参考文献】