B7-H3对肺炎链球菌脑膜炎小鼠金属基质蛋白酶-9蛋白表达的影响

发布时间：2018-05-04 00:42

  本文选题：肺炎链球菌脑膜炎 + 金属基质蛋白酶-9　； 参考：《苏州大学》2012年硕士论文

【摘要】：目的：细菌性脑膜炎是儿童期最常见的神经系统感染性疾病之一,其确切免疫病理机制尚待进一步确定。金属基质蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9, MMP-9)在血脑屏障的损害过程中发挥了重要作用。B7同源性3(B7homology3, B7-H3),作为协同刺激分子家族的一个新成员,在免疫应答中发挥着重要的调控作用。本研究通过体内外实验,系统分析B7-H3对肺炎链球菌脑膜炎MMP-9蛋白的表达和病情进展的作用,以期为细菌性脑膜炎的免疫干预提供新的思路和实验依据。 方法： 方法一(体内实验),研究B7-H3对肺炎链球菌脑膜炎小鼠神经行为改变、体质量变化和脑组织MMP-9蛋白表达的影响。取月龄1.5-2月的健康雄性BALB/c小鼠36只,随机分为3组：生理盐水对照组(CON组),肺炎链球菌组(Streptococcus pneumonia,SP组),肺炎链球菌+B7-H3(SP+B7-H3组),每组各12只。麻醉后,通过侧脑室途径注入肺炎链球菌悬液5μL+生理盐水10μL,制备肺炎链球菌脑膜炎模型；SP+B7-H3组注入肺炎链球菌悬液5μL和B7-H3蛋白10μL, CON组仅注入生理盐水15μL。三组小鼠均在术后6h、24h进行1)体质量变化观测；2)神经行为评估；3)HE染色方法观察脑组织炎症状况；4)免疫组织化学方法检测脑组织中MMP-9蛋白的表达。 方法二(体外实验),研究B7-H3对肺炎链球菌感染条件下小胶质细胞上清液MMP-9蛋白表达的影响。生后1-3天内的新生BALB/C小鼠,取其脑组织,经过分离、培养、纯化获得原代小胶质细胞,接种于24孔培养板,细胞密度：1×105/孔。实验分组：正常对照组(CON组)、肺炎链球菌感染组(SP组)、肺炎链球菌+B7-H3组(SP+B7-H3组),三组细胞中均加入等量的头孢曲松(浓度为100μg·mL-1)抑制细菌过度繁殖。分别在5h、24h、48h收集上清液,用ELISA方法检测上清液中MMP-9蛋白的表达。每次实验,每组每个时间点设3个复孔,并重复两次独立的实验。 结果： 结果一(体内实验), 1、神经行为评分：SP组在6h、24h时神经行为评分均较CON组明显降低(P0.01);SP+B7-H3组在6h、24h时神经行为评分明显低于SP组(P0.05)。 2、体质量变化：SP组在6h、24h时体质量下降均较CON组明显(P值分别为P0.01.P0.05);SP+B7-H3组在6h、24h时体质量均较SP组明显降低(P0.05)。 3、脑组织HE染色：6h时,相对于组,SP组小鼠软脑膜血管充血明显,蛛网膜下腔显著扩张,脑膜及蛛网膜下腔有少许炎性细胞浸润；24h时,相对于SP组,SP+B7-H3组小鼠软脑膜血管充血显著,蛛网膜结构完整性受损,蛛网膜下腔开放,脑膜及蛛网膜下腔炎性细胞浸润加剧。 4、脑组织免疫组化分析：CON组于6h、24h时均有少量MMP-9蛋白表达；SP组在6h、24h时与CON组比较MMP-9蛋白的表达均显著增高(P0.01)；SP+B7-H3组在6h、24h时与SP组比较MMP-9蛋白的表达均明显增高(P0.05)。 结果二(体外实验),SP组在5h、24h、48h时MMP-9蛋白的表达均明显高于CON组(P0.05)；SP+B7-H3组在5h、24h、48h时与SP组比较,MMP-9蛋白的表达均显著增高(P值分别为P0.01、P0.05、P0.05)。 结论： 1、本实验经侧脑室接种肺炎链球菌,成功建立了肺炎链球菌脑膜炎小鼠模型。 2、体内外实验证实,MMP-9蛋白在肺炎链球菌脑膜炎病理损伤和免疫反应过程中发挥了重要作用。 3、B7-H3加剧肺炎链球菌脑膜炎病情的进展,促进脑组织炎症反应,上调脑组织MMP-9蛋白的表达,表明B7-H3增强肺炎链球菌脑膜炎免疫炎症反应和病理损伤。
[Abstract]:Objective: bacterial meningitis is one of the most common infective diseases in childhood, and its exact mechanism of immuno pathology remains to be further confirmed. Metal matrix protease -9 (matrix metalloproteinases-9, MMP-9) plays an important role in the damage process of the blood brain barrier,.B7 homology 3 (B7homology3, B7-H3), as a synergistic stimulus. A new member of the molecular family plays an important regulatory role in the immune response. In this study, the effect of B7-H3 on the expression and progression of MMP-9 protein in Streptococcus pneumoniae meningitis was systematically analyzed in vivo and in vitro, so as to provide new ideas and experimental basis for the immune intervention of bacterial meningitis.
Method锛，

本文编号：1840849