原儿茶酸对体外神经干细胞增殖和分化的影响

发布时间：2019-09-27 22:01

【摘要】：帕金森病(Parkinson's disease, PD)是中老年人常见的神经系统变性疾病,临床治疗方法主要有药物治疗、外科治疗和细胞移植等。神经干细胞(Neural stem cells, NSCs)能够分化成PD所缺少的多巴胺能神经元,因此为细胞移植治疗PD带来了新的希望,但是目前仍然存在很多问题,如NSCs供应不足、移植后存活率低、分化为多巴胺能神经元的比例低等。 本文首先通过CCK-8试剂盒检测了体外单层贴壁培养的NSCs的生存力和生长曲线,考察了中药活性单体原儿茶酸(Protocatechuic acid, PCA)对NSCs增殖及自发性凋亡的影响；利用免疫细胞化学技术和流式细胞仪技术检测了酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase, TH)和核受体相关因子1(nuclear receptor-related factor1, Nurr1)阳性细胞的数量,通过蛋白质印迹法及RT-PCR的方法检测了TH蛋白及TH基因的表达,从而分别从细胞水平、蛋白质水平和基因水平上研究了PCA对NSCs分化为多巴胺能神经元的影响,并进一步探讨了PCA调节NSCs分化的作用机制。 结果显示,PCA能够依赖时间和剂量提高单层贴壁培养的NSCs生存力并促进NSCs的增殖；在PCA (0.06mM)作用下培养4d后,细胞的存活率提高至对照的142.5%±9.5%并有效地抑制了细胞的自发性凋亡。PCA单独使用不能诱导神经干/祖细胞的分化,但与1%胎牛血清的联合应用时,PCA有效地提高分化为多巴胺能神经元的比例。TH蛋白及TH基因的表达量分别提高至对照的180.67%和128.2%,同时Nurr1阳性细胞的数量也提高至FBS组的125%,提示在胎牛血清协同作用下,PCA的促分化作用可能与Nurr1通路密切相关。另外PCA也明显提高了分化显型的生存力且抑制了细胞凋亡,同时激活了细胞内源性的抗氧化酶系统。 综上所述,PCA能够有效地促进单层贴壁培养的NSCs增殖并抑制细胞凋亡；在1%胎牛血清协同作用下,PCA可有效促进NSCs分化为多巴胺能神经元的比例并提高细胞分化显型的生存力。
【学位授予单位】：大连理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R742.5

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本文编号：2542920