急性肠套叠缺血再灌注损伤机制及活体成像研究

发布时间：2020-03-23 13:21

【摘要】：目的:建立肠套叠缺血再灌注损伤动物模型,通过免疫组织化学染色,探索TLR4分子是否参与肠缺血再灌注损伤,运用TLR4量子点探针进行近红外光活体示踪和体外细胞成像实验,从分子影像水平实现肠缺血再灌注损伤的诊断,为防治肠缺血再灌注损伤提供理论依据。方法:1、收集因肠套叠导致的肠坏死组织标本,通过免疫组织化学染色观察坏死肠组织中TLR4和p38MAPK分子的表达情况。2、62只BALB/c小鼠中,随机选取36只用于观察病理学过程,16只作为对照组,剩余10只作为肠套叠缺血再灌注组。建立肠套叠动物模型并使用Micro-CT进行验证;采用H-E染色评估肠套叠的动态变化,同时采用免疫组织化学染色检测TLR4和p38MAPK分子在缺血再灌注损伤的肠组织中的表达情况。3、将18只裸鼠随机分为3组,分别为正常对照组、肠套叠缺血再灌注组、肠套叠缺血再灌注加抑制剂组。建立肠套叠缺血再灌注损伤模型和肠上皮细胞缺氧复氧模型,运用TLR4量子点探针,通过活体和体外细胞实验,探索量子点探针在肠套叠缺血再灌注损伤模型中以及在肠上皮细胞缺氧复氧模型中的显像作用。结果:1、对于人体标本,TLR4在肠套叠坏死肠组织中的表达明显增强,呈棕褐色弥漫或颗粒状分布于细胞膜和细胞浆中。p38MAPK在坏死肠组织中呈高表达,其定位以胞浆为主。2、在46只小鼠中成功建立了回结肠套叠模型。在肠套叠发病开始和第5分钟,没有明显血供障碍。第15分钟,在肠套叠模型中可见血供障碍。第30分钟,发现血供障碍或静脉淤血。随着时间的推移,血供障碍和小肠梗阻加剧。肠套叠120分钟时,6只小鼠有肠坏死,2例肠穿孔。在Micro-CT上,46只小鼠可见套块。这些套块中,36个呈同心圆征和10个呈假肾形。在增强CT上,肠套叠30分钟时发现小肠梗阻。60分钟后,肠套叠肠壁增厚,小肠因充满液体而扩张。组织学证实46例肠套叠。在≤30分钟组,没有明显的炎症变化,提示肠套叠在急性期和早期阶段,但在30分钟组,肠套叠模型中发现炎症性改变和坏死区域。TLR4主要在上皮细胞胞膜和胞浆表达。在肠套叠IR模型组织中,肠黏膜上皮细胞中TLR4的MQS评分为5.189±2.483;对照组中为1.186±1.171,两组比较有统计学差异(P0.05)。p38MAPK主要在肠上皮细胞胞浆表达。在肠套叠IR模型组织中,肠黏膜上皮细胞中p38MAPK的MQS评分为8.712±0.920;对照组中为2.109±0.109,两组比较有统计学差异(P0.05)。3、活体实验中,在IR组,腹部肠管可见明显TLR4荧光信号;在正常对照组中,腹部肠管未见TLR4荧光信号;在IR+TAK-242组中,腹部肠管亦未见明显TLR4荧光信号。细胞实验中,TLR4在肠上皮细胞缺氧复氧+Anti-TLR4-QDs组中显示为强烈的红色荧光信号,呈弥漫或颗粒状分布于细胞膜和胞浆中,细胞核上无红色荧光信号;在单纯量子点对照组、正常肠上皮细胞+Anti-TLR4-QDs组和缺氧复氧+TLR4预处理组中均未见明显红色荧光信号。结论:1、TLR4在肠套叠坏死肠组织中呈高表达,呈弥漫或颗粒状分布于细胞膜和胞浆中。p38MAPK在坏死肠组织中呈高表达,其定位以胞浆为主。2、在小鼠肠套叠模型中,随着时间的推移,肠道血供有恶化趋势。肠套叠期间发生缺血再灌注损伤,并发现肠套叠缺血再灌注损伤与TLR4和p38MAPK上调有关。3、TLR4量子点探针可以特异性地与肠缺血再灌注损伤中高表达的TLR4分子结合,为急性肠套叠缺血再灌注损伤早期活体显像的有效手段。
【图文】：

TLR4在肠套叠坏死肠组织细胞的胞膜和胞浆内强表达

图 2 p38MAPK 在肠套叠坏死肠组织细胞的胞浆内强表达。讨 论套叠是指某一段肠管及系膜套入其相连的肠管内引起的肠梗腹症之一。随着套叠时间的延长，会使原来套叠的肠管受压压引起肠管的痉挛，，致使套叠部位的肠管发生血液循环障碍静脉受压迫导致血液回流受限引起肠壁充血水肿及静脉曲张淋巴、静脉回流障碍加重，就会造成动脉供血不足以至于引起长时间套叠，使套叠部位的肠管缺血，会引起肠管的缺血坏血，部分肠套叠复位后肠组织会出现缺血再灌注损伤。小肠缺a Reperfusion Injury，IRI）是小肠发生缺血后再灌注加重存结构损伤的现象[19]。最常见的表现为腹痛、血便和腹部肿块。病理分为三期：肠
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R725.7

【参考文献】

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1 刘永芳;刘志刚;秦丹;丰新民;;SB203580对肠缺血再灌注大鼠p38 MAPK及细胞凋亡的影响[J];中国误诊学杂志;2010年12期

2 陈冰心;任澎;;心肌缺血再灌注损伤信号分子p38MAPK的研究进展[J];心肺血管病杂志;2010年01期

3 李美玉;魏凤香;李慧玲;张瑞林;胡黎平;;异搏定和能量合剂对肠缺血再灌注所致肝损伤的保护作用[J];中山大学学报(医学科学版);2008年S1期

4 刘文军;贾一韬;夏照帆;付晋凤;马兵;吕开阳;卫伟;;大鼠肾缺血再灌注损伤后p38丝裂原活化蛋白激酶的活化及氧自由基清除剂对其的影响[J];第二军医大学学报;2008年02期

5 孟庆涛;夏中元;陈向东;;参附抑制缺血再灌注大鼠肠上皮细胞凋亡的作用及机制[J];武汉大学学报(医学版);2007年06期

6 刘金舟;郑先念;瞿卉;;阿魏酸钠在大鼠肠缺血再灌注损伤中的保护作用及机制研究[J];中华医学杂志;2006年22期

7 古松钢;许建衡;;依达拉奉对大鼠肠缺血再灌注损伤的保护作用[J];实用医学杂志;2006年10期

8 ;Effect of nuclear factor kappa B on intercellular adhesion molecule-1 expression and neutrophil infiltration in lung injury induced by intestinal ischemia/reperfusion in rats[J];World Journal of Gastroenterology;2006年03期

9 ;Inhibition of p38 mitogen-activated protein kinase may decrease intestinal epithelial cell apoptosis and improve intestinal epithelial barrier function after ischemia- reperf usion injury[J];World Journal of Gastroenterology;2005年05期

10 周水生,罗德生,高卉,万敬之,雷平;亚低温缺血预处理对大鼠缺血再灌注肠保护作用的研究[J];中国病理生理杂志;2004年12期

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1 石海峰;小肠缺血再灌注损伤的多层螺旋CT灌注成像研究[D];复旦大学;2014年

2 石卉;肠脂肪酸结合蛋白和D-乳酸在缺血性肠病诊断中的研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年

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1 刘晓敏;量子点免疫荧光双色标记检测醛糖还原酶和Toll样受体4在细胞模型及糖尿病大鼠肾脏组织中的表达[D];中国人民解放军医学院;2015年

本文编号：2596781