Foxc2在婴幼儿血管瘤中的表达水平及其与临床特征相关性的研究

发布时间：2020-03-25 00:27

【摘要】：背景:婴幼儿血管瘤(Infantile hemangiomas,IHs)是内皮细胞和周细胞异常增殖引起的婴幼儿最常见的良性血管瘤,其发病率为4%至5%。早产、低出生体重、女性、白种人、胎盘异常、双胞胎和高龄产妇是IH发生发展的危险因素。虽然大多数病变可自然消退,但约12%的病例因并发症需要治疗,超过50%的未经治疗的IH可能导致毁容性永久的后遗症。婴幼儿血管瘤增殖和退化的确切机制尚不清楚,目前主要认为血管生成或血管发生参与婴幼儿血管瘤的发生发展。Foxc2蛋白是转录因子家族,通过促进细胞增殖、EMT、血管生成和淋巴管生成调控肿瘤转移。目前,尚未有研究证实Foxc2在婴幼儿血管瘤中的表达水平及其作用机制,也未见Foxc2的表达水平与婴幼儿血管瘤患儿临床特征之间的相关性。故有必要研究Foxc2在婴幼儿血管瘤中的表达水平及其与婴幼儿血管瘤患儿临床特征之间的相关性,为婴幼儿血管瘤的发生发展提供基础的理论指导及治疗的潜在靶点。目的:初步研究Foxc2在婴幼儿血管瘤中的表达水平及其与婴幼儿血管瘤临床特征之间的相关性,为婴幼儿血管瘤的发生发展提供理论指导及治疗的潜在靶点。方法:收集2016年至2018年期间就诊与山东大学附属省立医院烧伤整形美容外科的婴幼儿血管瘤患儿的血管瘤标本及其瘤旁组织标本共计21对,统计患儿的临床资料,并采用荧光定量PCR、Western blot及免疫组织化学检测血管瘤及瘤旁组织中Foxc2、VEGR-A、VEGFR-2、Notch1和D114的表达水平。运用SPSS 20.0软件分析进行数据分析统计。计量资料以均数±标准差表示,用t检验或方差分析,相关性使用Spearman相关分析。可信区间为95%,P0.05为差异具有统计学意义。结果:本研究纳入婴幼儿血管瘤患儿共计21例,其中发病fB长10m的有13例,发病时长≥10m的有8例。患儿平均年龄为11.05±7.51月龄,男女比例为3:4,52.38%的婴幼儿血管瘤分布在背部。婴幼儿血管瘤的各项参数如下:血管瘤的长轴长为3.46±1.42cm,短轴长为2.85±1.17cm,表面积为11.31±8.94cm2,血管瘤深度为1.01±0.52cm。研究发现Foxc2 mRNA和蛋白在婴幼儿血管瘤中的表达水平高于瘤旁组织,且Foxc2mRNA在95.24%(20/21)的婴幼儿血管瘤中Foxc2 mRNA的表达水平高于瘤旁组织,两者之间的差异具有统计学意义(26.73±23.63 vs 8.29±6.52,P=0.001)。VEGR-A和VEGFR-2 mRNA和蛋白在婴幼儿血管瘤中的表达水平高于瘤旁组织,47.62%(10/21)的婴幼儿血管瘤中的VEGR-A mRNA和95.24%(20/21)的婴幼儿血管瘤中的VEGFR-2mRNA的表达水平高于瘤旁组织,两者之间的差异具有统计学意义(4.93±9.83 vs 2.31±0.69,P=0.014;43.65±23.16 vs 13.58±22.97,P=0.000)。Notchl和D114mRNA在婴幼儿血管瘤中的表达水平高于瘤旁组织,76.20%(16/21)的婴幼儿血管瘤中的Notchl mmRNA和85.71%(18/21)的婴幼儿血管瘤中的D114 mRNA的表达水平高于瘤旁组织,两者之间的差异具有统计学意义(11.28±7.81 vs7.03±4.03,P=0.010;21.82±15.75vs 7.23±8.80,P=0.000)。Spearman相关分析发现,在婴幼儿血管瘤组织中Foxc2的表达水平与VEGR-A、VEGFR-2的表示水平之间无相关性(R2=0.359,P=0.110;R2=0.275,P=0.227),Foxc2的表达水平与Notchl、D114的表示水平之间存在强正相关(R=0.725,P=0.000;R2=0.649,P=0.001)。在Foxc2的表达水平与其临床特征的相关性研究发现,在婴幼儿血管瘤组织中Foxc2的表达水平与发病时长、长轴长度、短轴长度、表面积和深度之间的无相关性(R2=0.1,P=0.666;R2=0.421,P=0.058;R2=0.231,P=0.314;R2=0.311,P=0.169;R2=0.063,P=0.804),亚组分析发现虽然l0m组的婴幼儿血管瘤组织中Foxc2的表达水平与≥l0m组的婴幼儿血管瘤组织中Foxc2的表达水平无明显差异(23.25±15.13vs 32.39±33.81,P=0.403),但是在l0m组的婴幼儿血管瘤组织中Foxc2的表达水平与发病时长之间存在强正相关(R2=0.646,P=0.017),在≥l0m组的婴幼儿血管瘤组织中Foxc2的表达水平与发病时长之间存在强负相关(R2=0.715,P=0.046)。结论:在婴幼儿血管瘤中,Foxc2mRNA和蛋白的表达水平明显升高,同时VEGR-A、VEGFR-2、Notch1和D114 mRNA和蛋白的表达水平也明显升高。Spearman相关分析发现Foxc2的表达水平与Notch1、D114之间存在强正相关,与VEGR-A、VEGFR-2之间不存在相关性。临床研究发现在婴幼儿血管瘤组织中Foxc2的表达水平与发病时长、长轴长度、短轴长度、表面积和深度之间无相关性,而亚组分析发现在10m组的婴幼儿血管瘤组织中Foxc2的表达水平与发病时长之间存在强正相关,在≥10m组的婴幼儿血管瘤组织中Foxc2的表达水平与发病时长之间存在强负相关,Foxc2的表达水平与婴幼儿血管瘤的周期演变存在一定的相似性。
【图文】：

表达水平,内参,曲线,加样

表达量（如图２），由溶解曲线可知，ＰＣＲ产物具有特异性，由扩增曲线可知Ｆｏｘｃ２逡逑ｍＲＮＡ在婴幼儿血管瘤中的表达水平高于瘤旁组织，且加样误差较小，结果可靠。逡逑统计分析后发现（如图３），Ｆｏｘｃ２ｍＲＮＡ在９５．２４％（２０／２１）的婴幼儿血管瘤中Ｆｏｘｃ２逡逑ｍＲＮＡ的表达水平高于瘤旁组织，其平均表达水平显著高于瘤旁组织，两者之间的逡逑差异具有统计学意义（２６．邋７３±２３．邋６３邋ｖｓ邋８．邋２９±６．邋５２，Ｐ＝０．邋００１）。逡逑１＊１逦＇￣邋邋Ｓｊ逦逦—邋逦逡逑ＩＪ邋Ｉ—＾Ｌｊ逡逑＞逦＇？逦＇￣￣ｍ逦ｉ邋丨＿＿■■■！？0逡逑Ｃ邋逦０邋？逦——？．？＊？■？邋邋逡逑＾＾１１逦Ａ逡逑Ｉ」Ｉ—逡逑－－－＾邋邋邋－ｉｔ－邋－－邋＾邋？邋ｉｒ邋—ｉ邋？逦—ｍ逡逑图２荧光定量ＰＣＲ扩增曲线和融解曲线－Ｆｏｘｃ２。Ａ：内参ＧＡＰＤＨ扩增曲线；Ｂ：内参ＧＡＰＤＨ逡逑融解曲线；Ｃ：目的基因Ｆｏｘｃ２扩增曲线，Ｄ：目的基因Ｆｏｘｃ２融解曲线。逡逑Ａ逦■丨，、逦Ｂ逡逑１２０－１逦１５０－１逡逑１００－１逦■邋ｎｉ逦｜逡逑窆逦８０N逦■芝逡逑Ｉ逦Ｉ逦Ｉ邋Ｉ邋ｉ逦

曲线,曲线,表达水平,内参

山东大学硕士学位论文逡逑表达量（如图２），由溶解曲线可知，ＰＣＲ产物具有特异性，由扩增曲线可知Ｆｏｘｃ２逡逑ｍＲＮＡ在婴幼儿血管瘤中的表达水平高于瘤旁组织，且加样误差较小，结果可靠。逡逑统计分析后发现（如图３），Ｆｏｘｃ２ｍＲＮＡ在９５．２４％（２０／２１）的婴幼儿血管瘤中Ｆｏｘｃ２逡逑ｍＲＮＡ的表达水平高于瘤旁组织，其平均表达水平显著高于瘤旁组织，两者之间的逡逑差异具有统计学意义（２６．邋７３±２３．邋６３邋ｖｓ邋８．邋２９±６．邋５２，Ｐ＝０．邋００１）。逡逑１＊１逦＇￣邋邋Ｓｊ逦逦—邋逦逡逑ＩＪ邋Ｉ—＾Ｌｊ逡逑＞逦＇？逦＇￣￣ｍ逦ｉ邋丨＿＿■■■！？0逡逑Ｃ邋逦０邋？逦——？．？＊？■？邋邋逡逑＾＾１１逦Ａ逡逑Ｉ」Ｉ—逡逑－－－＾邋邋邋－ｉｔ－邋－－邋＾邋？邋ｉｒ邋—ｉ邋？逦—ｍ逡逑图２荧光定量ＰＣＲ扩增曲线和融解曲线－Ｆｏｘｃ２。Ａ：内参ＧＡＰＤＨ扩增曲线；Ｂ：内参ＧＡＰＤＨ逡逑融解曲线；Ｃ：目的基因Ｆｏｘｃ２扩增曲线，Ｄ：目的基因Ｆｏｘｃ２融解曲线。逡逑Ａ逦■丨，，、逦Ｂ逡逑１２０－１逦１５０－１逡逑１００－１逦■邋ｎｉ逦｜逡逑窆逦８０N逦■芝逡逑Ｉ逦Ｉ逦Ｉ邋Ｉ邋ｉ逦
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R732.2

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