急性白血病患儿单个核细胞Ndrg1基因表达情况及其意义

发布时间：2020-04-07 21:18

【摘要】： 前言 Ndrg1(N-myc downstream regulated gene 1)基因定位于8号染色体，受上游N-Myc基因调控。目前研究表明，Ndrg1具有调节细胞生长和分化等多种生物学功能。各种恶性实体肿瘤和恶性肿瘤细胞株Ndrg1表达水平显著降低，并与肿瘤分化程度、肿瘤转移能力和临床预后密切相关，已公认为一种肿瘤转移抑制基因和抑癌基因，但目前国内外尚无关于儿童急性白血病Ndrg1表达情况的临床研究报道。 目的 研究儿童急性白血病Ndrg1基因表达情况，分析比较不同危险度ALL患者单个核细胞Ndrg1基因表达水平，探讨Ndrg1表达水平与ALL临床预后和治疗反应的关系，为指导临床个体化治疗奠定理论基础。 方法 以我院儿童血液肿瘤科2004年6月～2006年12月收治的65例新发急性白血病患儿为实验对象，其中ALL41例，AML24例。对照组为我院门诊常规体检儿童，共12名。收集研究对象骨髓或外周血抗凝标本，密度梯度离心法提取制备单个核细胞，Trizol试剂提取单个核细胞总RNA，逆转录后进行荧光定量PCR。根据样本荧光定量PCR动力曲线确定目标基因Ndrg1和管家基因GAPDH的Ct值，对照各自的标准曲线确定样本Ndrg1和GAPDH基因起始拷贝数(表达水平)。以规一化Ndrg1值([起始拷贝数_(Ndrg1)／起始拷贝数_(GAPDH)]×100)判断Ndrg1基因mRNA相对表达水平。 结果 1、以HL-60细胞Ndrg1和GAPDH普通PCR扩增产物10倍梯度稀释制成的系列标准品为模板行荧光定量PCR，根据系列稀释标准品起始拷贝数和Ct值绘制的Ndrg1和GAPDH的标准曲线的直线回归系数分别为0．996和0．999，说明在本实验设定的标准品稀释浓度范围内，荧光定量PCR动力曲线Ct值与模板起始拷贝数间具有良好线性关系，因此可通过荧光定量PCR在本研究设定的实验条件下准确测定临床样本Ndrg1和管家基因GAPDH表达水平。 2、尽管正常对照组、ALL组、AML组，以及AL组外周血单个核细胞归一化Ndrg1值的中位数均高于相应骨髓单个核细胞归一化Ndrg1值的中位数，但经统计学分析，，各组外周血和骨髓单个核细胞Ndrg1表达水平无显著性差异(P＞0．05)。 3、AL单个核细胞Ndrg1表达水平(归一化Ndrg1值的中位数为0．19)显著低于对照组(归一化Ndrg1值的中位数为0．41)(P=0．02)。ALL和AML组归一化Ndrg1的中位数分别为0．17和0．19，也显著低于对照组，但ALL和AML间表达水平无显著性差异(P=0．591)。 4、泼尼松敏感型ALL患儿单个核细胞Ndrg1表达水平显著高于泼尼松不敏感型ALL，归一化Ndrg1值的中位数分别为0．29和0．15，经统计学比较差异具有显著性(P=0．022)。 5、标危组ALL单个核细胞Ndrg1表达水平显著高于高危组ALL，两组归一化Ndrg1值的中位数分别为0．25和0．13(P=0．034)。 6、ALL-L3单个核细胞Ndrg1表达水平低于L1和L2，可能与L3白血病细胞增殖旺盛、临床进展迅猛有关。 结论 1、急性白血病患儿单个核细胞Ndrg1表达水平显著低于对照组外周血单个核细胞，提示Ndrg1作为一种抑癌基因和肿瘤转移抑制基因在白血病发生发展方面可能具有重要作用。 2、研究结果表明，Ndrg1表达量与儿童ALL临床危险度、泼尼松试验敏感性等预后因素和治疗反应密切相关。泼尼松敏感和低危组ALL患者Ndrg1表达水平显著高于泼尼松不敏感者和高危组患者，高度提示Ndrg1是反映ALL预后和治疗反应的重要分子生物学指标，在ALL预后判断和指导个体化治疗方面可能具有重要应用价值。 3、ALL-L3单个核细胞Ndrg1表达水平显著低于L1和L2，很可能与L3白血病细胞增殖能力强、临床进展快有关。由于Ndrg1具有抑制细胞分化的作用，而且在细胞周期S期表达水平较低，G0和G1期表达较高，推测目前采用烷化剂(细胞周期非特异性化疗药物)为主的联合化疗治疗L3和Burrkit淋巴瘤疗效显著，可能与L3(Burrkit淋巴瘤)Ndrg1低表达有关。
【图文】：

以前列腺癌细胞株(PC一3)为阳性对照，采用常规PCR鉴定Ndrgl扩增产物。同时各检测1例ALL和AML患者骨髓和1例对照儿童外周血单个核细胞Ndrgl扩增产物(图1)。正常空白250bP100bP图1常规PcR助KGI的表达结果从上图可见，扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳后于98匕p处见单一清晰的扩增条带，表明引物设计正确合理。二、Ndrgl和GAPDH基因荧光定量PCR标准曲线的建立l、Ndrgl基因荧光定量PCR标准曲线的建立以Ndrgl标准品起始拷贝数的对数为横坐标，Ct值为纵坐标，拟合Ndrgl荧光定量PCR标准曲线。标准曲线斜率k二一3.84，截距b=49.11，直线回归相关系数:二0.996(图2)。

图2Ndgrl荧光pCR标准曲线2、GAPDH基因荧光定量PCR标准曲线的建立以GAPDH标准品起始拷贝数的对数为横坐标，Ct值为纵坐标，拟GAPDH荧光定量PCR标准曲线。标准曲线斜率k=一3.51，截距b=.75，直线回归相关系数:=0.999(图3)。hGAPDH02胡口;roeu，。加t一。t创}附Dx立，.:一3五t*r亡匆龟:叮t44505550665077508
【学位授予单位】：四川大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R733.71

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本文编号：2618404