儿童微小病变肾病几种相关分子的研究

发布时间：2020-04-19 09:50

【摘要】：原发性肾病综合征(PNS)是儿童时期的常见病，其主要的病理类型为微小病变型肾病(MCNS)，约占80％左右。虽然绝大多数患儿对肾上腺糖皮质激素的治疗敏感，但是部分患儿容易出现频繁复发，还有少数患儿对激素耐药；这部分患儿将面临长期应用激素所带来的一系列副作用，从而影响患儿的生活和学习，并有可能发生肾功能不全。因此，对于儿童PNS，特别是MCNS的发病、复发和耐药机制的研究，一直是国内外儿科肾脏病工作者广泛关注的研究重点。 大量蛋白尿是肾病综合征(NS)的主要特点，主要是由于肾小球滤过膜对血浆蛋白的通透性增高所致。肾小球滤过膜，自内而外由三部分组成，即带窗孔的血管内皮细胞、肾小球基底膜(GBM)以及足细胞。近年来，越来越多的关于“足细胞足突和裂孔隔膜(SD)”分子组成的研究证实这些结构在维持选择通透性方面起更重要的作用。MCNS的特征性病理改变表现为电镜下足细胞足突的广泛融合。 本研究将以寻找MCNS的发病、复发、耐药相关因素为出发点，以足细胞为线索，以前期微小病变肾病肾脏基因表达谱的研究为基础；检测了nephrin、podocin、FGF-2和Angpt13在儿童MCNS中的表达；从裂孔隔膜相关分子、足细胞损伤等不同角度，分别探讨它们在蛋白尿的发生，肾病的复发等病理过程中的可能作用。 第一部分nephrin和podocin mRNA在儿童微小病变肾病中的表达 目的 nephrin是一种细胞黏附蛋白，其缺乏导致芬兰型先天性肾病综合征；podocin是一种整合膜蛋白，其基因突变涉及常染色体隐性遗传的激素耐药型肾病综合征，两者均表达于裂孔隔膜。检测nephrin和podocin mRNA在儿童微小病变肾病中的表达，探讨它们在蛋白尿发生机制中的作用。 方法(1)根据临床和肾脏病理检查将研究对象分为三组，即微小病变组17例、非微小病变组7例和单纯性血尿组9例。前两组为原发性肾病综合征组，按激素效应和复发情况分为激素敏感组和激素耐药组，以及频复发组和非频复发组。原发性肾病综合征组在电镜下均显示足细胞足突不同程度的融合，按足突融合程度分为足突广泛融合组18例和足突部分融合组6例。单纯性血尿组经肾活检证实 龙才诊扒稼穿夸礴龙钾摘央分济必班牙 为薄基底膜肾病5例，轻微病变4例，电镜下未显示足细胞足突的改变。(2)将 所有研究对象的肾组织标本抽提RNA进行实时荧光定量PcR，检测nephrin和 podocin的mRNA表达水平;测量了8例微小病变肾病及4例薄基底膜肾病患儿 的足突宽度。(3)将所得数据与各项临床资料进行统计学分析，运用SPSS10.O软 件行t检验、卡方检验和相关分析。 结果(l)nephrin和podoein mRNA的表达:24例原发性肾病综合征患儿的 neP而n和podoein mRNA表达量明显低于单纯性血尿组(P=0.021，P=0.003)， 其中以17例MCNS患儿的基因表达量下降为主(介0.031，P=0.oo2)。所有病 例中，nephrin与podocin mRNA之间的表达水平变化呈正相关(;=0.550，尸= 0.001)。(2)与蛋白尿的关系:nePhrin mR，JA的表达量与24小时尿蛋白量呈负 相关(r二一0.626，P= 0.001);podocinm和叮A的表达量与24小时尿蛋白量无明 显相关性。③与足突融合的关系:足突广泛融合组的nep城n mRNA显著低于 足突部分融合组(P=O.001)。nephrin mRNA表达量与足突宽度(FPw)呈负相 关(r=一0.824，，p=0.001);podoeinm胭A表达量与FPw无明显相关性。FPw 与24小时尿蛋白量呈正相关(;二一0.874，P=0.000)。(4)与激素效应和复发的 关系:nephrin和podocin mRNA在激素敏感组和激素耐药组间，以及在频复发 组和非频复发组间无明显差异。 小结MCNS组中neP如n和pedocin mRNA表达量明显减少，并与蛋白尿增多、 足突宽度增加呈负相关，提示nep而n mRNA减少可能使足突融合、足突增宽， 最终导致大量蛋白尿。Podocin mRNA的表达随nephrin mRNA的减少而减少。 未发现这两种裂孔隔膜相关分子不同程度的表达与原发性肾病综合征患儿的激 素耐药和激素敏感患儿的频复发有关。 第二部分FGF--2在儿童微小病变肾病中的意义 目的FGF一2是足细胞损伤存在和持续的标志。观察FGF一2在微小病变肾病患儿 的肾组织、血和尿中的表达情况;探讨FGI了一2在MCNS中的作用。 方法(1)收集50例微小病变型肾病患儿的临床资料，按激素效应分为激素敏感 组和激素耐药组，前者按复发情况分为频复，发组和非频复发组。(2)用免疫组化 法(免疫酶法，ABC法)检测肾组织中的FGF一2沉积，以IMS彩色图像分析系 统量化免疫组化的结果。同时检测加例原发性肾病综合征患儿不同时点(肾病 综合征发病时、足量激素治疗8周内缓解或未缓解时和复发时)的血、尿FGF一2 浓度，用酶联免疫吸附试验(EUSA)检测血、尿中的FGF一2含量，观察血、尿 FGF一2的动态变化。(3)统计学分析运用SPSSro.0软件，分别进行卡方检验、t 检验和相关分析。 结果(1) FGF一2的分布:在MCNS患儿的肾组织中，代表FGF一2的棕褐色阳性 颗粒主要分布在肾小球足细胞(沿毛细血管撑)和肾小管上皮细胞的胞浆中，且 有不同程度的表达。(2)肾小球FGF一2的表达:频复发组的肾小球免疫组化阳性 指数(positive index，pl值，代表FGF一2的表达量)明显低于非频复发组的肾小 球PI值(P0.0
【图文】：

o，5pg随机引物和0.5p90应5分钟，置于冰上，加液spl1pl(200旦旦丝旦1.25pl0.5pl(20旦旦丝旦2.25pl℃10分钟，37℃60分钟，混匀并分装，于一20℃保存。式反应(real一timeFQ一PcR)外文献资料并采用计算机辅料法进行检测，其上、下游

三、足细胞足突的融合与nePrhin和扭记ocinmRNA的表达(一)nephrin和pdocinmRNA在不同程度的足突融合中的表达情况资深的肾脏病理学者在单盲的前提下，根据电镜检查时足突的形态(见图1一6)以及足突融合的范围，将PNS患儿分为足突广泛融合组18例和足突部分融合组6例(包括足突少量融合)。在足突广泛融合组与足突部分融合组间，nephrinmRNA的表达有差异，前者的表达显著低于后者，提示nephrinmRNA表达越少则足突融合越严重。然而，podocinmRNA的表达在两组之间无明显差别，见表1一6。表1一6.nephrin和podocinmRNA与足突融合间的关系对照组(9)足突部分融合(6)足突广泛融合(18)nep丽npodoein4.55士0.892.95士0.914.65士0.74$2.21士0.943.45士0.621.66士0.88p成0.oolvs对照组，$尸毛o.oolvs足突广泛融合图1一6.(A)薄基底膜肾病，足细胞足突如“指状”垂直排列于GBM上
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R726.9

【引证文献】

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1 张雪荣;肾敷灵外敷配合雷公藤多甙治疗难治性肾病大鼠肾损害机理的研究[D];湖北中医药大学;2012年

本文编号：2633217