【摘要】： 目的重症肌无力(MG)是一种自身免疫性疾病(AID),目前它的治疗方法有很多,而糖皮质激素仍是一种有效而主要的治疗方法,研究发现,糖皮质激素的药理作用是通过与GR高亲和力结合而介导,GR是GC发挥生理及药理作用的关键环节,GR的含量直接影响机体对GC的反应,而热休克蛋白90(HsP 90)是GR的重要伴侣蛋白。本研究主要通过研究重症肌无力患儿在经过糖皮质激素治疗前后其受体及HSP90α、β的改变,探讨热休克蛋白90(HsP 90αβ)和糖皮质激素受体(GRαβ)在糖皮质激素敏感型、依赖型儿童重症肌无力中的表达情况及其与患儿激素敏感性的关系 方法 1.收集正常组(17名)及患者SS组(19名)、SD组(3名)临床资料并分析; 2.处理全血:用人淋巴细胞分离液分离MG组、健康对照组外周血单个核细胞(PBMC):一部分细胞提取RNA,合成cDNA用于做RT-PCR;另一部分细胞滴片后用于做免疫细胞化学; 3.免疫细胞化学(ICC)法观察健康对照组、GC治疗前组、GC治疗后组PBMC中GRα、β和HSP90α、β表达情况; 4.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测PBMC中GRα、β和HSP90α、β,设立健康对照组、GC治疗敏感组、GC治疗依赖组,每组抽血3ml,选用RT-PCR方法测定上述指标; 结果 1. (1)激素敏感组、激素依赖组治疗前GRα、GRβ阳性细胞及mRNA表达均高于对照组,差异有显著性(P0.05),激素敏感组激素依赖组之间比较,差异无显著性(P0.05);(2)经激素治疗后,激素敏感组GRα、GRβ阳性细胞及mRNA和激素依赖组GRα阳性细胞及mRNA表达恢复正常,但激素耐药组GRβ表达仍高于正常组,差异有显著性(P0.05);(3)激素敏感组治疗后GRα、GRβ阳性细胞及mRNA表达均有下降,其中GRβ阳性细胞及mRNA表达量治疗后较治疗前下降,差异有显著性(P0.05);(4)激素依赖组治疗后GRα、GRβ阳性细胞及mRNA表达下降,但差异无统计学意义(P0.05) 2.(1)治疗前激素敏感组、激素耐药组HSPα、HSPβ阳性细胞及mRNA表达均高于对照组,差异有显著性(P〈0.05);而激素敏感组,激素耐药组HSPα、HSPβ阳性细胞及mRNA表达差异无显著性(P0.05)。(2)治疗后激素敏感组,激素依赖组HSPα阳性细胞及mRNA与对照组比较仍升高,差异有显著性(P0.05);而HSPβ阳性细胞及mRNA表达有下降,其中敏感组经治疗后与正常组差异无显著性(P0.05),激素依赖组治疗后与对照组比较仍高于正常组,差异有显著性(P0.05);(3)敏感组治疗后HSPαβ阳性细胞及mRNA表达均下降,但前后比较差异无显著性(P0.05);(4)激素依赖组治疗后HSPα阳性细胞及mRNA表达较治疗前升高、而HSPβ阳性细胞及mRNA表达下降,但差异无显著性。 结论 1.儿童重症肌无力患者绝大多数对激素治疗敏感,在我们的病人中,未发现对激素抵抗者,激素依赖患儿仅有3例(占13.6%)。 2.激素敏感组,激素依赖组GRα、GRβ阳性细胞及mRNA在GC治疗前均明显高于健康对照组,推测MG患者PBMC内GRα、GRβ阳性细胞及mRNA表达异常与MG的发病有关,GRα增高可能与转运受阻或其功能结构异常有关,而GRβ增高可抑制GRα携带GC转运入细胞核发挥药理学作用;用GC治疗后,激素敏感组GRα、GRβ阳性细胞及mRNA表达均下降,与正常组比较差异无统计学意义,而激素依赖组GRα阳性细胞及mRNA表达恢复正常,但激素耐药组GRβ阳性细胞及mRNA表达仍有增高,与正常组比较有统计学意义;同时敏感组GRβ治疗后较治疗前有下降,而耐药组GRβ治疗后无明显下降,因此我们认为GRβ的高表达抑制或减低GRa对靶基因的激活作用,进而影响GC的基因调控作用,可能正是激素耐药的原因所在。 3. HSP90α、β在GC治疗前后均高于对照组,推测MG患儿处于应激状态,它的增高与HSP90在炎症等病理状态下应激性增加有关,而HSP90的表达异常增加可能在一定程度上影响了GR功能的正常发挥及GC生理学效应。在激素敏感组经激素治疗后HSP90β的表达与正常组无差异,而激素依赖组HSP90β仍高于正常组,因此我们考虑可能是HSP90β导致GR与GC结合困难或HSP90与GR解离困难,使GR无法很好发挥与GC的有效结合,从而影响GC调节的基因转录作用,导致患儿对GC依赖。
【图文】：
图 1 对照组 GRα免疫组化图片（40×） 图 2 敏感组治疗前 GRα免疫组化图片（40×）Fig 1 GRα of normal group by ICC（40×） Fig 2 GRα of GC Sensitive grouppre-treatment by ICC（40×）
图 1 对照组 GRα免疫组化图片（40×） 图 2 敏感组治疗前 GRα免疫组化图片（40×）Fig 1 GRα of normal group by ICC（40×） Fig 2 GRα of GC Sensitive grouppre-treatment by ICC（40×）
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R746.1
【参考文献】
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2663560
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