早期环境干预对缺氧缺血性脑损伤新生鼠神经丝蛋白表达及超微结构的影响

发布时间：2020-05-28 08:07

【摘要】： 目的:缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic Brain Damage,HIBD)是围产期严重威胁新生儿健康甚至致残的一种常见疾病,严重影响儿童生活质量,但迄今为止尚无理想的治疗方法。目前普遍认为早期干预有助于脑损伤康复,其中环境干预占有相当重要的地位。环境刺激可影响脑的形态和功能,增强神经系统的可塑性,提高学习记忆功能,对脑发育具有重要作用。本实验通过检测早期环境干预后HIBD大鼠脑组织NFP的含量、海马区存活神经元数及超微结构改变,探讨早期早期环境干预对于促进缺血缺氧的脑组织恢复及神经网络重建的可能机制,旨在为临床应用丰富环境治疗新生儿HIBD提供基础理论支持和指导。方法:7日龄(postnatal day 7,P7)Sprague-Dawley(SD)新生大鼠,采用Rice法建立HIBD模型,随机分为三组:正常组、非干预组及干预组,于建模后24h进行早期抚触和丰富环境干预,干预28d后,应用Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力,测量体重,HE染色观察海马病理形态学改变,尼氏染色计数海马区存活神经元数目,免疫组织化学法检测左侧与右侧脑组织海马神经丝蛋白(neurofilament protein,NFP)积分光密度值之比(L:R_(NF)),透射电镜观察海马超微结构改变。结果:1.在Morris水迷宫的定位航行和空间探索实验中,干预组成绩明显优于非干预组(P＜0.001),与正常组差异不明显(P＞0.05)。 2.在体重上,干预组明显高于非干预组(P＜0.05),与正常组差异不明显(P＞0.05)。 3.HE染色见干预组患侧海马轻度异常,如神经元排列稍紊乱、少量细胞丢失等;非干预组左侧海马明显异常,细胞层数减少,神经元排列散乱、稀疏,细胞间隙增大,脱失明显,核仁不清,可见核固缩、核碎裂;正常组患侧海马无异常。 4.神经元尼氏染色计数显示,干预组患侧海马神经元存活数目多于非干预组(P＜0.001),与正常组差异不明显(P＞0.05)。 5.免疫组织化学染色结果显示,干预组左侧海马NFP表达强于非干预组(P＜0.01),与正常组差异不明显(P＞0.05)。 6.透射电镜观察左侧海马区,非干预组海马神经细胞固缩改变,线粒体肿胀,神经丝数量减少,排列稀疏,突触数量减少,突触间隙增宽,突触囊泡减少,突触后致密物变薄。干预组海马神经元和突触无明显病理改变。结论: 1.HIBD新生鼠患侧脑组织NFP表达下降,海马区神经元数减少,反映新生鼠脑灰质及脑白质均对缺氧缺血损害敏感。 2.丰富环境可减少海马区神经细胞的丢失及脑NFP的降解,因此对HIBD新生鼠的神经元及轴突均具有保护作用,从而有利于维持神经网络的完整及改善重建。 3.早期环境干预能减轻HIBD大鼠脑神经丝、突触等超微结构的损伤,对神经系统的可塑性有利。 4.早期环境干预能显著改善HIBD大鼠的远期学习记忆功能,提示早期环境干预对保护远期学习记忆功能有重要意义。
【图文】：

早期干预,体重比

倍)下非干预组患侧脑组织可见大片坏死细胞，胞浆红染，核结构不清，甚至胞膜破裂，细胞解体消失;凋亡细胞呈弥散或小灶性分布，表现为细胞体积缩小，，核固缩，核碎裂:海马锥体细胞间隙明显增大，细胞严重皱缩深染，核缩小，核仁不清楚，甚至细胞脱失。三组大鼠体重增长也有明显变化，非干预组体重增长缓慢，反应迟钝，较正常组及干预组有明显差异(P<0.05);而干预组活泼好动，灵活敏捷，体重增长较正常组无明显差异(P>0.05)(见表1、图1)o表1早期干预28d后三组体重比较例数体重(g)正常组非干预组干预组114.75土4.6394.叨土10.09al”.45土7.04加202020a:P<0.05与正常组对比:b:P>0.05与正常组对比:c::p<0.05与非干预组对比

积分光密度,磷酸化,脑组织,双侧

积分光密度值之比(LRN;)。大鼠P35时，正常组、非干预组、干预组 LRNF值有显著差异 (p<0.01)。非干预组LRNF值明显小于正常组(p<0.01)，干预组LRNF值高于非干预组(p<0.01)，但与正常组无明显差异(P>0.05)(见表2、图2)。表2双侧脑组织磷酸化NFP积分光密度比值分组例数L:RNF正常组非干预组干预组l， 015士0.1220.372土0.156a0.839土0.188b‘ a:p<0.01与正常组对比:b:P>0.05与正常组对比 :c:p<0.01与非干预组对比图2双侧脑组织磷酸化NFP积分光密度比值3.丰富环境干预后RIBD新生鼠海马神经元计数的变化正常组海马有多层锥体细胞，排列整齐紧密;神经元胞核染成蓝色，尼氏小体密集，染成深蓝色。非干预组神经元明显减少，失去正常结构，细胞排列散乱，神经元
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R722.1

【参考文献】