外源性降钙素基因相关肽拮抗内皮素-1致新生鼠肺出血的实验研究

发布时间：2020-06-29 16:33

【摘要】：前言 新生儿肺出血(NPH)是新生儿期常见危重症之一，起病急，早期不易发现，常常是多种严重新生儿疾病的临终表现，缺氧、感染、低体温是引起肺出血的主要原因。在我们前期的研究工作中，通过对新生大鼠肺出血的动物实验研究证实：低温缺氧后复温供氧可致新生大鼠肺出血；外源性内皮素-1(ET-1)可致新生大鼠肺出血并且推测外源性降钙素基因相关肽(CGRP)可以对此起到治疗的作用。CGRP是迄今为止发现体内已知的最强的扩血管肽，广泛的存在于中枢和外周神经系统中，尤其是在肺神经内分泌细胞(PNEC)和肺的神经纤维中，其扩张肺血管作用缓慢却持久且明显，在维持低肺血管张力中起重要作用。ET-1是迄今为止体内已知的最强大血管收缩物质，已证实肺中存在两种内皮素受体亚型：ET_A和ET_B受体，ET_A受体主要位于血管平滑肌和支气管平滑肌，介导血管、支气管收缩反应，在许多临床研究中，发现ET-1与肺动脉高压关系密切。同时也有实验证明CGRP和ET-1有相互拮抗的作用，本研究希望通过动物实验初步了解外源性CGRP能否预防性拮抗外源性ET-1致肺出血的作用。 材料与方法 1．新生Wistar二级大鼠40只(日龄4～5天)随机分成生理盐水对照组(A组)10只及实验组(B、C、D组)各10只，实验组外源性CGRP浓度分别为6.7×10~(-10)mol／L(B组)；6.7×10~(-8)mol／L(C组)；6.7×10~(-6)mol／L(D组)，于气管插管后经气管导管滴人生理盐水及不同浓度CGRP各20μl，2小时后处死，观察肺组织大体改变及肺组织光镜改变，将肺出血程度分为五级：Ⅰ正常；Ⅱ肺水肿；Ⅲ点状肺出血；Ⅳ局灶性肺出血；Ⅴ弥漫性肺出血，了解CGRP与新生鼠肺出血的相关性。 2．在第一个实验基础上继续进行，生理盐水对照组(E组)；实验组外源性CGRP浓度分别为6.7×10~(-10)mol／L(F组)；6.7×10~(-8)mol／L(G组)； 6.7 xlo一‘moFL(H组)，每组在滴人cGRPI小时后继续滴人浓度为4x 10一‘m0FL ET一1并继续观察2小时后处死动物，观察肺大体改变，将肺出 血程度分为五级:方法同上，进一步用免疫组化方法测定各组肺组织中 ET一1、eNOS的表达水平，并进行不同组间比较。 实验结果 1.从浓度6.7 x 10一，omoFL一6.7 x 10一6 mol/L的外源性CGRP对新生 大鼠肺组织均没有出血倾向的影响，其中B、C、D组各组间肺大体改变的比 较差异无显著性(P0.05)且与对照组(A组)组间比较差异无显著性(P 0 .05)。 2.在经不同浓度CGRP预处理的肺内滴人浓度为4 xlo一“m0FL ET一1 后各组肺组织损伤程度比较:高浓度CGRP组(H组)损伤程度最轻，对照 组(E组)肺出血最明显，损伤程度最重，H组的95%可信区间与E、F、G各 组的95%可信区间都不重叠(P0.05)，H组与E、F、G各组差别均有统计 学意义;而E、F、G各组的95%可信区间都有重叠(P0.05)，E、F、G各组 差别均无统计学意义。 3.在经不同浓度CCRP预处理的肺内滴人ET一1后各组间肺组织中 ET一1水平的比较:高浓度CGRP组(H组)的免疫组化强度较其他组都低， 并且95%可信区间与E、F、G各组的95%可信区间都不重叠(P0.05)，其 差别均有统计学意义。 4.在经不同浓度CGRP预处理的肺内滴人ET一1后各组间肺组织中 eNOS水平的比较:高浓度CGRP组(H组)的免疫组化强度较其他组都高， 并且95%可信区间与E、F、C各组的95%可信区间都不重叠(P0.05)，其 差别均有显著意义。 讨论 在证实了外源性CGRP不能导致新生鼠发生肺出血的基础上，本研究 再次证实了外源性ET一1可以导致新生鼠发生肺出血，但预先给予一定浓度 的外源性CGRP(6.7 xl。一6 m0FL)可以预防或减轻其肺出血的病理改变。 推测其机制可能为: 1.浓度为6.7、10一“moFL的外源性cGRP经气道局部给药能够使肺 组织中的内源性ET一1表达下降。从而使其收缩血管平滑肌和支气管平滑 肌的作用减弱。 2.浓度为6.7 x 10一“moFL的外源性cGRP经气道局部给药可使血管 内皮细胞eNOS表达增多，由于NO的强大的舒张血管、抑制血小板聚集等 调节作用，从而使局部肺组织血管扩张。并且eNOS也能抑制ET一1的缩血 管作用。 3.外源性cGRP可降低钙离子活性，降低肌丝细胞内ca，‘浓度，降的 血管平滑肌对Ca，+的敏感性，从而对ET一1缩血管作用起到持续性的抑制。 4.cGRP可有效拮抗ET所致的血压升高，肺动脉和肠系膜动脉收缩， 从而改善肺动脉的痉挛状态。 以上机制说明，外源性CGRP可通过对ET一1多方面的抑制作用，包括 减少ET一1在肺组织的表达，增多eNOS在肺组织的表达，降低Ca，‘浓度及 活性等来改善局部肺血管的痉挛，减少肺出血的发生。 结论 1.滴人浓度为6.7 xlo一“m0FL一6.7 xlo一，“m0FL的外源性CGRP对 常氧状态下支气管上皮完整的新生大鼠没有肺出血的影响。 2.经过预先使用浓度为6.7 xlo一6 m0FL的外源性CGRP处理的新生 大鼠可以拮抗浓度为4.0 x 10一“的ET一1致肺出血的反应，低于上述浓度的 CGRP对ET一1致肺出血无拮抗作用。 3.经浓度为6.7/10一‘moFL的外源性cGRP预处理后再由外源性 E1’一1诱导肺出血的肺组织中免疫组化反应ET一l(irET一1)阳性强度明显低于 其余各组，阳性表达率亦最低
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R722.15
【图文】：

图1Wistar大鼠，日龄4一5天，体重8一109表1实验动物分组及各组给药浓度动物数量(只)所滴药物生理盐水给药浓lOl0CGRP6.7x10一10m1Ol0CGRPCGRP6.7x10一8m6.7x10一6m物手术液2小时后，采用断头法处死动物，快速剪刃明匈腔皮脏，用冰冻生理盐水冲洗1一2次，无菌纱布拭干，大，

度L)肺大体改变正常水肿点状局灶弥漫死亡数合计000水ro0一，01000090一810090一610010O2，p>0.95对照组比较‘P>0.05较有P>0.05

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 马岳,陈克正;外源性降钙素基因相关肽预防内皮素-1致新生鼠肺出血的实验研究[J];现代临床医学生物工程学杂志;2004年06期

2 陈克正,高晓燕;新生鼠肺出血时肺组织中内皮素-1、一氧化氮合成酶及丙二醛的水平与表达[J];中华急诊医学杂志;2004年07期

3 陈玉君;陈克正;刘唐威;庞玉生;;血管内皮生长因子在肺出血新生鼠肺组织中的表达及其作用[J];实用儿科临床杂志;2007年06期

4 陈玉君;刘唐威;陈克正;庞玉生;;内皮素-1受体拮抗剂在预防新生鼠肺出血中的作用[J];临床儿科杂志;2010年11期

5 陈玉君;陈克正;刘唐威;庞玉生;;血管内皮生长因子在肺出血新生大鼠肺组织中的表达[J];实用儿科临床杂志;2009年24期

6 章呜皋;;复方地ia汤治疗肺出血[J];江苏中医药;1964年02期

7 高秀芬;新生儿肺出血37例临床分析[J];承德医学院学报;1995年01期

8 杨碰狮,叶明珠;酒精性肺出血一例[J];中华结核和呼吸杂志;1999年09期

9 向建文,罗先琼,陈运彬;新生儿肺出血52例临床分析[J];中国优生与遗传杂志;2001年03期

10 王振西 ,刘玉荣 ,杨广平;新生儿肺出血早期气管插管临床观察[J];中国煤炭工业医学杂志;2003年08期

相关会议论文 前10条

1 陈玉君;黄丽萍;庞玉生;陈克正;;内皮素受体、内皮素转换酶-1在新生鼠肺出血发生过程中肺内的表达[A];中华医学会第十五次全国儿科学术大会论文汇编（上册）[C];2010年

2 吴中海;潘秉兴;王宁黔;史月;李自强;;新生鼠离体脑片吸气神经元的分布及非NMDA受体对呼吸的调制[A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集[C];2002年

3 刘超;陈璐;袁庆新;刘翠萍;茅晓东;;宫内营养不良对新生鼠胰腺发育及功能影响的研究[A];第二届全国妊娠糖尿病学术会议论文汇编[C];2008年

4 吴中海;史月;王剑莉;李自强;;异丙酚对新生鼠离体延髓脑片吸气神经元放电的影响[A];中国生理学会第六届应用生理学委员会全国学术会议论文摘要汇编[C];2003年

5 潘丽;步军;孙建华;薛辛东;;β-catenin在高氧致新生鼠BPD中的作用及其机制的研究[A];第六届江浙沪儿科学术会议暨儿科学基础与临床研究进展学术班论文汇编[C];2009年

6 邱国萍;;肺出血一肾炎综合征误为肺结核一例[A];第六届全国中西医结合肾脏病学术会议论文汇编[C];2000年

7 庞希宁;张海心;刘朝阳;杨立松;夏鲲;顾文佳;宋今丹;吴玉斌;李玉杰;;内毒素诱导新生鼠产生一氧化氮与肾脏损伤的研究[A];中国细胞生物学学会医学细胞生物学、免疫细胞生物学和发育生物学专业委员会学术研讨会论文摘要汇编[C];2002年

8 竺淑芳;顾薇薇;;新生儿肺出血的早期发现与护理[A];浙江省医学会围产医学分会成立大会暨“围产医学热点问题”学术会议论文汇编[C];2008年

9 顾晓生;;7例外伤性肺出血的法医病理学分析[A];全国第七次法医学术交流会论文摘要集[C];2004年

10 董伦;傅文燕;辛华;王晓静;;绞股蓝皂苷对酒精损伤的新生鼠脑内神经干细胞的保护作用研究[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年

相关重要报纸文章 前10条

1 白毅;中科院生物物理所发现T细胞数目参与调节天然免疫反应[N];中国医药报;2008年

2 北京大学基础医学院 周春燕;活体心脏带给我们什么[N];健康报;2008年

3 ;2000～2001年度冶金科学技术奖二等奖介绍(04)[N];世界金属导报;2002年

4 刘远桥邋朱广平;新技术救治新生儿肺出血[N];科技日报;2007年

5 祁阳县中西医结合医院 王海军;钩体病肺出血型一例诊治体会[N];大众卫生报;2009年

6 邢台市兽医院 邢兰君;当前猪常发病诊治要点解析(上)[N];河北农民报;2008年

7 陈实 李京华;亲骨肉刚出生，被他遗弃野外致死[N];新华每日电讯;2004年

8 邓久华;护理精神病人要勤观察[N];健康报;2003年

9 ;“风湿”的八大危害[N];医药养生保健报;2006年

10 刘强;让野菜回到餐桌上[N];经济消息报;2000年

相关博士学位论文 前10条

1 陈玉君;内皮素-1、血管内皮生长因子、缺氧诱导因子-1在新生鼠肺出血发生中的作用[D];广西医科大学;2007年

2 蔡栩栩;新生大鼠急性肺损伤病理特点及其与肺出血关系的研究[D];中国医科大学;2002年

3 杜悦;内毒素致新生大鼠肺血管内皮细胞和基膜改变的特点与肺出血的关系[D];中国医科大学;2003年

4 严彩霞;肠三叶因子对新生鼠NEC模型PI3K/AKT信号通路的影响及意义[D];武汉大学;2011年

5 杨君莉;口服Lal对正常新生鼠、成年鼠脾脏Th1/Th2平衡及诱导哮喘模型的影响[D];山东大学;2011年

6 何平;新生鼠窒息致心肌损伤及相关因素影响的实验研究[D];昆明医学院;2010年

7 王纪文;反复新生期大鼠痫性发作对神经发生的影响及其远期后果[D];山东大学;2005年

8 张素玲;高氧致新生鼠肺VEGF、VEGFRs、HIF-1α、ANG-1、TIE-2及PECAM-1动态改变的实验研究[D];中国医科大学;2005年

9 芦惠;氧化应激、一氧化氮合酶及表皮生长因子在新生鼠肠损伤中的动态变化及机制研究[D];中国医科大学;2005年

10 冯雪;新生鼠实验性缺氧缺血性损伤脑组织MCP-1及其受体CCR2的表达与小胶质细胞活化规律的研究[D];四川大学;2005年

相关硕士学位论文 前10条

1 马岳;外源性降钙素基因相关肽拮抗内皮素-1致新生鼠肺出血的实验研究[D];中国医科大学;2004年

2 黄丽萍;内皮素受体、内皮素转化酶-1在新生鼠肺出血发生过程中肺内的表达[D];广西医科大学;2010年

3 徐雅丽;维甲酸下调结缔组织生长因子表达减轻新生鼠高氧肺损伤[D];重庆医科大学;2011年

4 李潜;锂剂对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用及其机制[D];郑州大学;2010年

5 张雨平;Caspase-3抑制剂抗新生鼠缺氧缺血脑损伤实验研究[D];第三军医大学;2003年

6 张巧凤;AQP1及α-ENaC基因及蛋白在高氧致肺损伤新生鼠中动态变化[D];中国医科大学;2010年

7 宋纪国;高氧诱导肺损伤新生鼠肺表面活性蛋白基因表达的研究[D];重庆医科大学;2010年

8 周中成;双歧杆菌对新生鼠坏死性小肠结肠炎模型肠损伤保护机制的研究[D];苏州大学;2010年

9 徐洪涛;新生鼠高浓度氧肺损伤机制及临界值的研究[D];第三军医大学;2003年

10 黄英;I～（125）-NGF在缺氧新生鼠脑内的吸收分布[D];吉林大学;2005年

本文编号：2734083