促红细胞生成素对新生鼠缺氧缺血性脑病神经保护作用的影响

发布时间：2020-07-26 09:51

【摘要】：目的：新生儿缺氧缺血性脑病（hypoxic-ischemic encephalopathy，HIE）是指围生期窒息引起的部分或完全缺氧、脑血流减少或暂停而导致胎儿或新生儿脑损伤，目前尚无有效的治疗方法。本研究建立新生SD大鼠缺氧缺血性脑病（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD)模型，给与重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin，rh-EPO)干预，观察不同时间点各组SD大鼠脑组织病理变化，检测不同时间点各组外周血中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量，探讨促红细胞生成素对新生SD大鼠HIBD炎症反应的影响。方法：新生7日龄SD大鼠，性别不限，体质量12～16g，共90只，随机分成3组， HIBD模型组、rh-EPO治疗组和假手术组。改良Rice法制备HIBD模型，HIBD组(n=30)在模型制备后即刻腹腔注射生理盐水0.5ml/只；rh-EPO治疗组(n=30)在模型制备后即刻腹腔注射rh-EPO4000U/kg/只，rh-EPO稀释到0.5ml；假手术组(n=30)仅游离左侧颈总动脉而不结扎，不低氧；依据行为学观察指标对各组进行行为学观察；假手术组、HIBD模型组与rh-EPO治疗组分别于6h、12h，24h，48h，72h每个时间点取6只大鼠，断头取血，取左侧脑组织，苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining，HE)染色，显微镜下观察脑组织病理变化。ELISA法检测血中IL-1β含量，最后采用SPSS17.0统计软件对数据进行统计学处理。结果：⑴新生SD大鼠在HIBD后出现不同程度的行为异常。⑵HE染色①假手术组各时间点脑大小和形态基本正常，组织结构清晰，神经元排列整齐紧密。②HIBD组：缺血缺氧后6h：大脑皮质神经元层次清晰，细胞间隙增大，神经元细胞固缩变形。缺血缺氧后12h：大脑皮质神经元层次较清晰，细胞间隙明显增大，神经元细胞空泡变性，核深染。缺血缺氧后24h：大脑皮质神经元排列紊乱，细胞间隙进一步增大，可见神经元细胞变形，固缩，核深染，正常神经元细胞减少，皮层内毛细血管扩张，管腔内有较多红细胞聚集。缺血缺氧后48h：大脑皮质神经元排列紊乱，细胞间隙显著增大，神经元细胞变形，固缩，深染，正常神经元细胞显著减少，毛细血管显著扩张，血管周围腔隙扩大，有红细胞泄露到腔隙中。缺血缺氧后72h：大脑皮质神经元层次不清，细胞间隙显著增大，神经元细胞变形，固缩，深染，正常神经元细胞进一步减少，毛细血管显著扩张，血管周围腔隙进一步扩大，可见大片坏死灶。③rh-EPO治疗组：rh-EPO治疗后6h：大脑皮质神经元层次清晰，细胞间隙增大，神经元细胞变形，损伤程度较相应HIBD组轻。rh-EPO治疗后12h：大脑皮质神经元层次比较清晰，细胞间隙明显增大，神经元细胞变性，损伤程度较相应HIBD组轻。rh-EPO治疗后24h：大脑皮质神经元排列紊乱，细胞间隙进一步增大，神经元细胞变形，固缩，核深染，正常神经元细胞减少，损伤程度较相应HIBD组轻。rh-EPO治疗后48h：大脑皮质神经元排列紊乱，细胞间隙显著增大，神经元细胞变形，固缩，核深染，正常神经元细胞显著减少，损伤程度较相应HIBD组轻。rh-EPO治疗后72h：大脑皮质神经元层次不清，细胞间隙显著增大，神经元细胞变形，固缩，深染，正常神经元细胞进一步减少，可见坏死灶，损伤程度较相应HIBD组轻。⑶IL-1β检测结果：HIBD模型组、rh-EPO治疗组与假手术组比较，在各时间点SD大鼠外周血中IL-1β数值明显升高(P 0.01，统计学有显著性差异)，且表现出各自的变化规律，假手术组、rh-EPO治疗组与HIBD组血清中IL-1βOD值在6h分别为：0.40±0.059；0.45±0.072；0.50±0.044；12h分别为：0.38±0.037；0.58±0.031；0.70±0.032；24h分别为：0.40±0.031；0.49±0.042；0.52±0.029；48h分别为：0.40±0.030；0.48±0.034；0.51±0.034；72h分别为：0.39±0.030；0.46±0.028；0.48±0.024；HIBD大鼠IL-1β在6h和12h外周血中IL-1β含量均有显著增高，且呈上升趋势，24h达到高峰，但72h仍然较高；rh-EPO治疗组和HIBD模型组比较，血清IL-1β含量的差异有统计学意义(P0.05)，各时间点血清IL-1β含量相应下降。结论：⑴rh-EPO对HIBD新生大鼠进行干预能明显减轻脑组织的病理改变，提示rh-EPO对新生大鼠HIBD具有神经保护作用。⑵rh-EPO治疗后明显减轻新生大鼠HIBD后外周血中炎性因子IL-1β的释放，这可能是rh-EPO发挥神经保护作用的机制之一。
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R722.1
【图文】：

病理切片,大脑皮质神经元,损伤程度,细胞间隙

损伤程度较相应 HIBD 组轻（见图 7 rh-EPO 组 6h 病理切片）。rh-EPO 治疗后 12h：大脑皮质神经元层次比较清晰，细胞间隙明显增大，神经元细胞变性，损伤程度较相应 HIBD 组轻（见图 8 rh-EPO 组 12h 病理切片）。rh-EPO 治疗后 24h：大脑皮质神经元排列紊乱，细胞间隙进一步增大，神经元细胞变形，固缩，核深染，正常神经元细胞减少，损伤程度较相应 HIBD 组轻（见图 9 rh-EPO 组 24h 病理切片）。rh-EPO 治疗后 48h：大脑皮质神经元排列紊乱，细胞间隙显著增大，神经元细胞变形，固缩，核深染，正常神经元细胞显著减少，损伤程度较相应 HIBD 组轻（见图 10 rh-EPO 组 48h 病理切片）。rh-EPO 治疗后 72h: 大脑皮质神经元层次不清，细胞间隙显著增大，神经元细胞变形,固缩,深染,正常神经元细胞进一步减少，可见大片坏死灶，损伤程度较相应HIBD 组轻（见图 11 rh-EPO 组 72h 病理切片）。

病理切片,大脑皮质神经元,损伤程度,细胞间隙

病理切片

图 3 HIBD 组 12h 病理切片（HE 400 倍）图 4 HIBD 组 24h 病理切片（HE 400 倍）图 5 HIBD 组 48h 病理切片（HE 400 倍）图 6 HIBD 组 72h 病理切片（HE 400 倍）

【参考文献】