21-羟化酶缺乏症快速基因诊断技术的研究

发布时间：2020-07-26 16:09

【摘要】：目的：21-羟化酶缺乏症(21-Hydroxylase Deficiency,21-OHD)是先天性肾上腺皮质增生症(Congenital Adrenal Hyperplasia, CAH)最常见的类型,临床表现主要以雄激素增加和皮质醇、醛固酮合成受损为特点,可分为经典型和非经典型。经典型可表现为程度不同的女婴外生殖器男性化及出现低钠、低氯、高钾血症,若治疗不及时,严重者可出现失盐危象而死亡。基于经典型较高的发病率和死亡率,以血清17-羟孕酮(17-OHP)水平作为评价指标的新生儿筛查在临床上已作为常规的检查项目,但由于存在假阴性或假阳性结果,故基因诊断被推荐作为第二梯队的筛查方法。21-OHD致病基因CYP21A2是人类最具多态性的基因之一,真假基因高度同源,突变类型复杂多样,给基因诊断带来较大的难度。因此,本研究旨在建立一种临床上适用的快速准确的基因检测方法,为患儿提供准确的基因诊断,并为其家庭提供优质遗传咨询服务。 方法：对本实验室接诊的5个临床诊断为CAH的家系和9名(46,XX)外生殖器男性化患儿联合应用多重酶联依赖探针扩增(Multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)和特异性扩增测序技术检测CYP21A2基因突变情况。 结果：MLPA检测出4例等位基因杂合缺失,1例CYP21A2/CYP21A1P开米拉,并结合测序明确了10名患儿的基因型,其中1172N突变在CAH(SV)患者中最常见。 结论：MLPA与特异性扩增测序联合应用能够对21-羟化酶缺乏症进行快速准确的基因检测。
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R725.8
【图文】：

硕士学位论.，2.~一王一闷日!l禹2、致病基因及突变类型简介CYPZIAZ(旧称:CYPZI，CYPZIB，GeneID1598，GenBankNC000006.10)基因编码21一轻化酶，位于6号染色体短臂(6PZI.3)上的HLA一m区，与其无活性的假基因CYp21A1P(旧称:CYpZI只CYpZIA)串联排列在C钊和C4B基因的3’端(图l)，两者相距30Kb，真假基因均有10个外显子，9个内含子(图l)，其外显子和内含子序列的同源性分别为98%和%%l6]。c价℃y尸21与其端粒侧RPI基因和着丝粒侧ZX丫召基因以及他们的截短假基因尺尸它和ZW{剔基因串联构成RCCX模块(即一C4一CYPZI~TNX)(如图1所示)。在白种人中，69%为双模结构，即RPI一C4A一CYPZIAIP~TNXA.RPZ一C4B一CYP21AZ一TNXB，17%为只含真基因的单模结构，14%为三模结构，四模结构较为罕见阴。

整个C4B基因、CYPZIAZ基因5’端26或32kb(基于C4B基因的大小)片段的丢失，形成CYpZIAIP//CYpZIAZ开米拉(如图2所示)。开米拉上存在致病突变，故不能编码有活性的酶蛋白。目前为止，己报道6种不同类型的CYpZjAIp心了尸ZIAZ开米拉[9-l4]。7狱剔刀叭从万开米拉可见于EhierSDanloS综合征(一种常染色体隐性遗传性疾病)1151，一些Cl’PZIAZ基因完全缺失的病例与Zx剔刀人吹丑开米拉形成有关[l6，’刀，目前至少有5种类型的刀.剑/刀以男开米拉被证实[’8]。减数分裂过程中不等交换重排也能产生CYpZIAZ基因的重复而致病，但较为少见，且重复的等位基因上常存在严重的致病突变:P.Q31sx或IVsZ(c.293一13A/C>G)[’9-，’]。将近50，0的致病突变为非假基因来源的新发突变{22]，这些突变类型很容易通过测序技术进行检测。近来，该类报道逐渐增多123一25]。人类基因突变数据库(HGMD，~hgmd.cf.ac.uk)和人类细胞色素P450(cYP)等位基因命名委员会(http刃访WW{c即alleles.ki.se/cyPZI.htm)己记录了超过140种CypZIAZ基因突变类型，目前为止尚没有单个外显子缺失的报道。

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本文编号：2770988