Toll样受体在新生儿感染时的变化及临床意义

发布时间：2020-07-26 23:16

【摘要】： 目的新生儿免疫应答反应比较弱，易合并感染。Toll样受体可诱导非特异性免疫应答，介导特异性免疫反应，在抗感染免疫中发挥重要作用。本文探讨单个核细胞Toll样受体2、3、4 mRNA、MD-2 mRNA和MyD88 mRNA，以及单核细胞／中性粒细胞表面TLR2、TLR4蛋白和阳性细胞百分比在新生儿感染时的变化，分析它们在新生儿抗感染免疫中的作用和临床意义。同时观察中性粒细胞表面CD64表达，对TLR与CD64进行相关性分析，探讨他们在诊断新生儿感染中的作用。 方法收集200例不同胎龄(26—43周)新生儿外周血，分为败血症组(21例)、细菌性肺炎组(70例)、细菌性脑膜炎组(17例)、尿路感染组(38例)、先天性梅毒组(11例)和非感染组(43例)。采用荧光定量PCR法测定TLR 2、3、4、MD-2和MyD88 mRNA水平，应用流式细胞仪分析外周血单核细胞和中性粒细胞表面TLR2和TLR4蛋白及阳性细胞百分比水平。应用流式细胞仪定量检测其中120例感染和非感染新生儿外周血中性粒细胞表面CD64分子表达，并与CRP、WBC计数及血培养进行比较，评价它们对诊断新生儿感染的临床价值，同时对CD64与TLR做相关性分析。 结果1．157例感染新生儿中，早产儿94例，足月儿63例。新生儿感染临床症状不典型，主要表现为血氧饱和度下降、发热或体温不升、呼吸暂停、血小板减少、高胆红素血症、喂养不耐受(吃奶少或胃储留)等。21例败血症患儿血培养全部阳性，主要为凝固酶阴性葡萄球菌；肺部感染70例，呼吸道分泌物培养阳性36例，主要为肺炎克雷伯菌；尿路感染38例，清洁中段尿培养阳性16例，主要为肺炎克雷伯菌：脑膜炎组17例，脑脊液培养阳性共2例，均为大肠杆菌。 2．在非感染组新生儿，TLR2、3、4在mRNA、蛋白表达和阳性细胞百分比水平与胎龄均无明显相关性。 3．TLR2 mRNA在败血症组明显增加(6.14±0.80)，在G~+菌败血症组表达最为显著(6.43±0.74)，细菌性肺炎组(5.49±0.62)、细菌性脑膜炎组(5.61±0.60)和先天性梅毒组(5.89±0.38)也显著增加。单核细胞表面TLR2蛋白表达在败血症组最高，为1.94±0.52，G~+菌败血症表达为2.54±0.68，G~-菌败血症表达为1.25±0.51，两者比较P＜0.05，在细菌性肺炎组、细菌性脑膜炎组和先天梅毒组的表达均高于非感染组(1.27±0.75)。中性粒细胞表面TLR2蛋白表达在败血症组最高，为0.92±0.36，在G~+菌败血症为0.97±0.48，G~-菌败血症为0.80±0.31，两者比较P＜0.05。感染组TLR2阳性细胞百分比与非感染组比较差异无统计学意义。 4．TLR3 mRNA在各感染组与非感染组之间比较差异均无统计学意义。 5．败血症组TLR4 mRNA表达最高6.20±1.59，G~-菌败血症组为6.78±1.79，高于G~+菌败血症组5.39±0.78，(t=2.29，P=0.037)，在新生儿细菌性肺炎组、细菌性脑膜炎组和尿路感染组也明显增高。单核细胞TLR4蛋白表达在各感染组与非感染组之间差异无统计学意义，感染组TLR4阳性细胞百分比为(0.71±0.31)％，高于非感染组(0.29±0.36)％。中性粒细胞TLR4蛋白表达在败血症组最高，为3.25±1.25，在G~+菌败血症表达为2.97±1.48，G~-菌败血症为3.75±1.01，两者比较P＜0.05，肺炎组、脑膜炎组和尿路感染组比非感染组明显增高。感染组TLR4阳性细胞百分比与非感染组比较差异无统计学意义。 6．MD-2 mRNA在新生儿败血症组表达最高，G~+菌败血症组表达为5.43±1.19，G~-菌败血症组表达为5.76±1.17，两者比较差异无统计学意义(t=0.594，P=0.56)，细菌性脑膜炎组、尿路感染组MD-2 mRNA显著增高。MyD88 mRNA在新生儿败血症组表达最高5.71±0.94，MyD88 mRNA在G~+菌败血症组表达为5.92±1.01，在G~-菌败血症组表达为5.79±0.85，两者比较差异无统计学意义(t=0.793，P=0.86)，MyD88 mRNA在新生儿各感染组均显著增高。在败血症组，TLR2 mRNA与MD-2 mRNA相关系数为0.415，P=0.011；在肺炎组的相关系数为0.38，P=0.04。新生儿感染组TLR4 mRNA与MD-2 mRNA成正相关(R=0.39，P=0)，败血症组，TLR4 mRNA与MD-2mRNA相关系数为0.442，P=0.021：脑膜炎组TLR4 mRNA与MD-2 mRNA相关系数为0.913，P=0.004；尿路感染组相关系数为0.21，P=0.045。TLR2 mRNA与MyD88 mRNA相关性显著(R=0.956，P=0.00)。TLR4 mRNA与MyD88 mRNA相关性显著(R=0.997，P=0.00)。TLR3 mRNA与MD-2和MyD88 mRNA均无明显相关性。 7．G~+菌败血症组TLR2 mRNA(6.43±0.74)表达显著高于TLR4 mRNA(5.39±0.78)(t=1.56，P=0.024)，G~-菌败血症组TLR4 mRNA(6.78±0.79)表达显著高于TLR2 mRNA(5.64±0.68) (t=2.63，P=0.011)。败血症组单核细胞TLR2蛋白表达显著高于TLR4表达，有统计学意义(t=1.06，P=0.044)。TLR4阳性细胞百分比均显著低于TLR2阳性细胞百分比，P＜0.01。各感染组中性粒细胞表面TLR4蛋白表达水平高于TLR2，P＜0.05；各感染组与非感染组之间比较，TLR4阳性细胞百分比均显著低于TLR2阳性细胞百分比，P＜0.01。 8．败血症组CD64表达为7845.25±1790.07 M／U，显著高于局部感染组4003.86±1790.07 M／U(P=0.00)；通过绘制ROC曲线确定CD64阳性标准为≥3000 M／U。新生儿败血症组，CD64检测阳性率为91％，灵敏度为92％，明显高于血培养及CRP。败血症组和其他感染组TLR2和TLR4蛋白表达与CD64相关性分析，在败血症组TLR2和TLR4与CD64有显著相关性，通过TLR2和TLR4可区分G~+和G~-菌感染，但CD64不能。 结论新生儿感染时不同免疫细胞TLR2 mRNA／蛋白和TLR4 mRNA／蛋白表达显著增高，特别是在严重感染败血症组。TLR2主要在G~+菌感染增高，TLR4主要在G~-菌感染增高。TLR2和4表达与MD-2和MyD88有相关性，提示TLR2和TLR4及信号传导途径均参与新生儿抗感染免疫机制。新生儿感染时中性粒细胞CD64表达明显增高，可望成为诊断新生感染的指标，中性粒细胞表面TLR与CD64有显著相关性。这些结果为进一步深入了解新生儿抗感染免疫机制提供新思路和实验基础。
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R722.1
【图文】：

注意不要弄断)，2一8℃下7500转下一点先在小机器上甩一下，用10ul到那层白膜，如开始白膜就看不见或者A:在空气或真空中放置5一10分钟，5ulDEPC水，配成溶液A。通过测量数计算50倍。取出4u1A溶液+196u1D稀释倍数/1000)XB(多少溶液ml)=14ul溶液。在紫外分光光度仪上分别白的波长为280。A跑电泳，了解RNA的纯度:在l%琼15一20分钟，80一100MV，见图1。

TLR溶解曲线

TLR标准曲线

【引证文献】

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1 袁西华;陈昌辉;;髓样分化蛋白-2在转导内毒素信号中的作用及临床意义[J];实用儿科临床杂志;2010年06期

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1 袁西华;胆红素对新生儿脐血单核细胞MD-2、TRAF6 mRNA基因表达的影响[D];泸州医学院;2009年

本文编号：2771427