T3干预Flutamide诱导SD鼠生精上皮Connexin43表达及Sertoli细胞功能成熟的研究

发布时间：2020-07-29 21:03

【摘要】： 目的建立胚胎期Flu诱导SD鼠隐睾模型,研究Flu对生精小管管腔化、Sc成熟、细胞间连接蛋白Cox43表达的影响;以及T3对Cox43表达及Sc功能成熟的干预调控作用。方法①GD12-21SD孕鼠,皮下注射Flu(25mg/kg·d)诱导建立隐睾模型;PD1-13幼鼠,皮下注射T3(15μg/kg·d)干预。②应用Real-Time PCR技术和免疫组织化学法,分析PD13、PD15、PD17、PD20睾丸Cox43 mRNA表达及蛋白质定位分布差异。③HE染色观察PD10生精小管管腔化指数,生精小管直径和面积,以及管腔内Gonocytes分布。④采用Real-Time PCR技术,分析PD13、PD15、PD17 Sc SGP-2 mRNA表达。⑤采用免疫组织化学法,定量检测PD13、PD15、PD17 Sc细胞核BrdU掺合情况,Sertoli细胞增殖指数。结果 ①PD13、PD15 Flu诱导组睾丸Cox43 mRNA表达均明显低于正常对照组(P㩳0.05);PD17 Flu诱导组睾丸Cox43 mRNA表达与正常对照组无显著性差异(P㧐0.05)。PD20 Flu诱导隐睾组睾丸Cox43mRNA表达明显低于正常对照组(P㩳0.05)和非隐睾组(P㩳0.01),但是,PD20 Flu诱导非隐睾组睾丸Cox43 mRNA表达与正常对照组无显著差异(P㧐0.05)。T3干预后,PD13 Flu诱导组睾丸Cox43 mRNA表达明显升高,与正常对照组无显著差异(P㧐0.05)。T3干预后,PD20 Flu诱导隐睾组睾丸Cox43 mRNA表达明显高于非干预组(P㩳0.05),与正常对照组表达无显著差异(P㧐0.05);而PD20 Flu诱导T3干预非隐睾组与非干预组、正常对照组比较,Cox43 mRNA表达均无显著差异(P㧐0.05)。 ②PD13、PD 15 Flu诱导组生精小管内Cox43蛋白表达强度明显低于正常对照组(图1-5A、B和1-6A、B);PD17、PD20正常对照组生精小管基底膜精原细胞层无Cox43蛋白分布,而Flu诱导各组生精小管基底膜精原细胞层均有Cox43蛋白分布(图1-6C、D和1-7A、B、C)。T3干预后,PD13 Flu诱导组生精小管内Cox43蛋白表达强度明显升高,与正常对照组相似(图1-5C)。PD20 Flu诱导T3干预非隐睾组Cox43蛋白表达分布无异常,而Flu诱导T3干预隐睾组,基底膜精原细胞层仍有Cox43蛋白表达(图1-7D、E)。 ③随PD13-17时间推移,正常对照组和Flu诱导组Sc增殖指数均呈下降趋势。PD13、PD15、PD17 Flu诱导组Sc增殖指数明显高于正常对照组(P㩳0.01,图2-7)。T3干预后,PD13 Flu诱导组Sc增殖指数明显低于Flu诱导未干预组和正常对照组(P㩳0.01)。PD13正常对照组与Flu诱导组睾丸SGP-2 mRNA表达无显著差异(P㧐0.05);而PD15、PD17 Flu诱导组睾丸SGP-2 mRNA表达明显低于正常对照组(P㩳0.01)。T3干预后,PD13 Flu诱导组睾丸SGP-2 mRNA表达明显高于未干预组和正常对照组(P㩳0.01)。结论 ①胚胎期Flu暴露导致睾丸Cox43 mRNA表达下降和生精小管内Cox43蛋白表达分布异常。T3能上调Cox43表达,维持其正常表达。 ②胚胎期Flu暴露导致Sc功能成熟延迟或障碍,T3能够促进Sc功能成熟。 ③胚胎期Flu暴露导致生精小管腔化延迟、管腔中央Gonocytes残存,T3能够促进腔化延迟的生精小管正常管腔化。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R726.9
【图文】：

睾丸,基因表达,产物,长度

1-1：实时定量 PCR 检测 T3 干预 Flutamide 诱导 SD 鼠睾丸 Connexin43 基因表达。二图为标准曲线；中图为熔解曲线；下图为扩增曲线g1-1: Expression of Connexin43 gene in SD rat testis detected by Real time PCR, the testiduced by Flutamide and intervened by T3. Upper two figs: standard curve; medial fig: melrve; lower fig: amplification plot 1-2：PCR 产物特异性验证。（β-actin 产物长度为 150bp；Connexin43 产物长度为 233bp；P-2 产物长度为 141bp）100bp200bp300bpβ-actin Cox43 SGP-2 Marker

特异性,睾丸,标准曲线,基因

时定量 PCR 检测 T3 干预 Flutamide 诱导 SD 鼠睾丸 Connexin43 基因标准曲线；中图为熔解曲线；下图为扩增曲线xpression of Connexin43 gene in SD rat testis detected by Real time Py Flutamide and intervened by T3. Upper two figs: standard curve; mer fig: amplification plotβ-actin Cox43 SGP-2 Marker

睾丸,基因表达,表达水平

2-1：实时定量 PCR 检测 T3 干预 Flutamide 诱导 SD 鼠睾丸 SGP-2 基因表达。上二图为标曲线；中图为熔解曲线；下图为扩增曲线g2-1: Expression of SGP-2 gene in SD rat testis detected by Real time PCR, the testiduced by Flutamide and intervened by T3. Upper two figs: standard curve; medial fig: melrve; lower fig: amplification plot1.2 SGP-2 基因的 mRNA 表达情况结果显示（表 2-2，图 2-2）：PD13 Flu 诱导组 Sc 经 T3 干预后，SGP-2 mRNA达量较正常对照组和未干预组均明显升高（P㩳0.01），而正常对照组与 Flu 诱导 SGP-2 mRNA 表达无明显差异（P㧐0.05）；PD15、PD17 Flu 诱导组 Sc 中 SGP-RNA 表达量明显低于正常组（P㩳0.01）。表 2-2：实时定量 PCR 检测各组睾丸组织 SGP-2 基因相对表达水平（n=6， x ±s）Table2-2：Expression of SGP-2 gene in each group detected by Real Time PCR(n=6, x ±s)samples ΔCT2-ΔΔCT（RQ）

【参考文献】