CVB3对大鼠心肌成纤维细胞增殖及骨桥蛋白表达的影响

发布时间：2020-07-30 16:07

【摘要】： 目的：观察柯萨奇B3病毒(Coxsackie virus B3，CVB3)对大鼠心肌成纤维细胞增殖和骨桥蛋白(osteopontin，OPN)表达的影响，探讨OPN在病毒性心肌炎的可能作用机制。 方法：取出生3～7天的SD大鼠心脏，改良法原代培养心肌成纤维细胞，利用细胞形态及细胞免疫化学染色对细胞进行鉴定；分别用不同滴度的CVB3感染心肌成纤维细胞，采用MTT法检测其OD值，用RT-PCR和Western-Blot检测OPN mRNA和蛋白的表达。 结果： 1．用胰酶与胶原酶合用消化分离心肌成纤维细胞，可提高心肌成纤维细胞的存活率，心肌成纤维细胞抗波形蛋白(vimentin)染色阳性，抗α-横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin)染色阴性。 2．用MOI分别为0、0.2PFU/cell、0.5PFU/cell、1.0PFU/cell的CVB3感染心肌成纤维细胞，MTT测得其OD值分别为0.35±0.05、0.37±0.04、0.66±0.07、0.32±0.07，MOI为0.5PFU/cell组OD值高于对照组、0.2PFU/cell组及1.0PFU/cell组，差异有显著性(P＜0.05)。 3．用MOI为0.5PFU/cell的CVB3感染心肌成纤维细胞，用MTT测得对照组12h、病毒组12h、1d、2d、3d的OD值分别为0.36±0.06、0.47±0.06、0.56±0.04、0.72±0.04、0.64±0.02，病毒感染12h其OD值即增高，第2d达高峰，于第3d开始有下降趋势，各组比较差异均有显著性(P＜0.05)。 4．用RT-PCR测得心肌成纤维细胞对照组12h、1d、2d、3dOPN/β-actin光密度比值分别为0.38±0.06、0.35±0.02、0.41±0.07、0.30±0.06，各组比较差异无显著性(P＞0.05)；病毒组12h、1d、2d、3d OPN/β-actin光密度比值分别为0.56±0.06、0.72±0.05、0.98±0.06、0.86±0.02，病毒感染12h其光密度值即增高，第2d达高峰，于第3d开始有下降趋势，各组比较差异均有显著性(P＜0.05)。 5．用Western-Blot测得心肌成纤维细胞对照组12h、病毒组12h、1d、2d、3d OPN/β-actin灰度值分别为0.26±0.04、0.36±0.03、0.52±0.06、0.76±0.06、0.62±0.03，病毒感染12h其灰度值即增高，第2d达高峰，于第3d开始有下降趋势，各组比较差异均有显著性(P＜0.05)。 6．将RT-PCR OPN/β-actin光密度值及Western-Blot OPN/β-actin与MTT(OD)值进行相关分析，Pearson相关系数分别为r=0.951，P=0.000及r=0.954，P=0.000，二者呈正相关关系。 结论： 1．一定滴度的CVB3可诱导心肌成纤维细胞增殖。 2．CVB3可使心肌成纤维细胞增殖及OPN表达增加，在一定时间内呈时间依赖性。 3．OPN表达与心肌成纤维细胞增殖呈正相关，提示OPN可能通过与心肌成纤维细胞增殖互为因果，共同参与病毒性心肌炎的发病机制。
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R725.4
【图文】：

开始统计。细胞病变表示法:“一”无细胞病变，“+”<25%的细胞有病变，“料”25%一50%的细胞有病变，“+十十”50%一75%的细胞有病变，“十+++”75%以上的细胞有病变。以细胞CP少50%记为病变孔(见图3一3，表3一l)。图3一 3CvB3在H。la细胞上扩增时细胞形态改变a:正常Hela细胞 (x100):b:发生CPE的Hela细胞，细胞变圆变暗，漂浮成葡萄串样聚集 (x100)表3一ICVB3感染Hela细胞TCID50的测定结果(Reed-Mneneh法)病毒稀释度细胞CPE观察累计CPE总计细胞孔总数出现CPE阳性率(%)阳性孔阴性孔阳性孔阴性孔 4025025100(25/25)2l1721l7100(21/2l)10()(17门7)OnU100(13/13)100(9/9)100(5/5) 04077(l/4)(0/7) 4444410-10-2护丫0-s沪o-s0-v参照Reed一Mnench公式，距离比例 =(CPE阳性率高于50%的百分数一50)/ (CPE阳性率高于50%的百分数一CPE阳性率低于50%的百分数)。半数组织培养感染量(TCID50)的对数=大于50%的阳性百分比的最高稀释度对数+距离比例x稀释度间距的对数，查反对数表即可得到数值。由上表知evB3的TCIns。介于10一6一10一7之间。根据Reed一腼eneh法计算

预心肌成纤维细胞24小时，MTT结果显示，Mol为0.SPFU/cell时，可促进细胞增殖，其OD值明显高于MOI为0(对照组)、 0.2PFU/cell及 1.0PFU/cell组，差异均有显著性(尸<0.05)(见表3一2，图3一)。表3一2不同滴度CvB3诱导心肌成纤维细胞增殖MTT值(叉土，刀=12)CVB3浓度(MOI，PFU/eell)M罚，(0D值)0.35士0.050.37士0.040.66士0.07a0一32士0.07方差分析&N尺勺检验Mrl，(OD)值比较:介78.594，尸{.000，“与对照组、MOI为0.2PFU/ee】l、MOI为 1.OPFU/ccll组比较，差异均有显著性，尸<0.05

本文编号：2775772