缺锌促进SENP5过表达致小鼠胚胎心脏发育异常的研究

发布时间：2020-08-06 10:17

【摘要】：目的:1.观察缺锌是否造成心脏发异常。2.观察SENPs各成员在胚胎心脏发育过程中的变化趋势及重要性。3.探讨缺锌是否通过诱导SENP5过表达导致小鼠胚胎心脏发育异常。研究内容及方法:1.缺锌对心肌细胞增殖、凋亡及分化的影响提取小鼠心肌细胞,进行原代培养,通过免疫荧光双标记实验鉴定提取出的原代心肌细胞是否为心肌干细胞,建立缺锌模型,利用CCK8和流式细胞术检测心肌细胞在正常和缺锌两种不同的情况下的活性及凋亡情况,Western Blotting检测原代心肌细胞的分化情况。2.SENPs各成员在小鼠胚胎心脏发育过程中的表达水平及变化趋势收集E10.5至P7发育阶段的小鼠胚胎心脏标本,通过免疫组化及Western Blotting检测SENPs蛋白在心脏中的表达情况。3.缺锌时SENP5蛋白表达变化及其对心肌细胞活性及分化的影响建立心肌细胞H9c2的缺锌模型,在正常和缺锌两种不同的情况下,通过Western Blotting检测心肌细胞中SENP5蛋白的不同表达情况。创建SENP5干涉质粒,对心肌细胞进行转染。通过CCK8检测在SENP5干涉的情况下心肌细胞的活性情况,Western Blotting检测心肌细胞的分化情况。结果:1.免疫荧光结果显示原代培养的心肌细胞绝大部分表明都带有Sca1和c-kit特异性标记物,证实为心肌干细胞。CCK8及流式结果显示,与正常对照组相比,缺锌时心肌细胞的活性明显降低,凋亡数量增加。Western Blotting结果示,与正常对照组相比,缺锌时心肌干细胞的分化能力下降。2.免疫组化及Western Blotting结果显示,在E10.5-E19.5发育阶段,SENP5在小鼠胚胎心脏中的表达量逐渐上升,在P1-P7发育阶段,SENP5的表达量逐渐升高,表明在正常胚胎心脏发育的重要阶段,SENP5的表达水平随着心肌干细胞分化能力的减弱而升高,间接说明了SENP5在胚胎心脏发育过程中的重要作用。3.Western Blotting结果证实,相比于正常对照组,心肌细胞内SENP5的表达量在缺锌时明显增加。CCK8及Western Blotting结果显示,与正常对照组相比,缺锌时,正常心肌干细胞活性下降,分化能力减弱;而SENP5干涉的心肌干细胞在缺锌状态下,其活性度及分化能力与正常对照组略有下降,但高于正常细胞缺锌组;正常状态下,SENP5干涉心肌干细胞的活性和分化能力与正常对照组相比无明显差别。结论:缺锌通过诱导SENP5过表达导致小鼠胚胎心脏发育异常。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R722.1
【图文】：

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天津医科大学硕士学位论文一、缺锌对心肌细胞图 1.免疫荧光检测心肌干细胞。A、原代细胞图像，可见纺锤缘向外伸展；B、第二代传代细胞，可见其间混杂有多角形或第四代传代细胞，可见细胞形态逐渐均一化，细胞增殖旺盛胞表达心肌干细胞特异性标记物 Sca1；E、可见大部分细胞表性标记物 c-kit 表达。1.2.2 CCK8 结果CCK8 结果显示，与正常对照组相比，缺锌时心肌细胞浓度时活性度即下降到 40%以上，见图 2。P＜0.05，有统计

心肌细胞凋亡,流式,情况,缺锌

图 3.流式检测心肌细胞凋亡情况。图 A 为正常心肌细胞处理组；图 B 为缺锌心肌细胞处理组。1.2.4 Western Blotting 结果见图 4，与正常对照组相比，缺锌时，心肌干细胞中干性维持指标 Sca1、c-kit蛋白表达量升高，而分化指标 GATA4 蛋白的表达量下降。用 Image J 软件分析WB 条带，SPSS 分析所得数据，P＜0.05，有统计学意义。

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【参考文献】