基于FXR探讨利胆合剂治疗婴儿胆汁淤积性肝病的作用机制研究

发布时间：2020-08-07 21:50

【摘要】：目的:从胆汁酸自身反馈调节角度探讨利胆合剂对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导的急性肝内胆汁淤积模型幼龄大鼠FXR、SHP、UGT2B4、BSEP基因及蛋白表达的影响,观察大鼠血清生化指标及肝脏组织病理变化,明确利胆合剂治疗婴儿胆汁淤积性肝病的作用靶点。研究内容与方法:1.造模:根据淤胆型肝炎动物模型的建立方法,将30只雌雄各半、体重70-90g的SPF级离乳后幼龄SD大鼠,入住SPF屏障系统中饲养,不同药物干预第5天时,除正常组外,一次性予ANIT灌胃建立肝内胆汁淤积模型。2.动物分组及干预方法:将30只雌雄各半SPF级离乳后幼龄SD大鼠,适应性喂养3天后予称重,将大鼠按体重随机分为正常组、模型组、熊去氧胆酸组、利胆合剂高剂量组、利胆合剂低剂量组,每组六只,雌雄各半。正常组(N):予生理盐水连续灌胃6天模型组(M):予生理盐水灌胃4天,第5天予ANIT溶液(1ml/100g)灌胃给药1次熊去氧胆酸组(UDCA):0.3%熊去氧胆酸(2ml/100g)灌胃6天,第5天灌胃后间隔4-6小时另予ANIT溶液(1ml/100g)灌胃给药1次利胆合剂高剂量组(LDM-H):利胆合剂(7.4g/2ml)灌胃6天,第5天灌胃后间隔4-6小时另予ANIT溶液(1ml/100g)灌胃给药1次利胆合剂低剂量组(LDM-L):利胆合剂(7.4g/4ml)灌胃6天,第5天灌胃后间隔4-6小时另予ANIT溶液1ml/100g)灌胃给药1次3.检测指标:(1)检测大鼠的TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、γ-GT、ALP;(2)各组大鼠肝脏苏木精伊红染色,观察肝脏形态结构变化。(3)实时PCR方法检测肝脏FXR、SHP、UGT2B4、BSEP基因表达水平。(4)Western blotting方法检测肝脏FXR、SHP、UGT2B4、BSEP蛋白表达水平。结果:1.利胆合剂高剂量组可以改善肝内胆汁淤积的症状,降低TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、γ-GT、ALP的水平优于熊去氧胆酸组,并能减轻胆汁淤积造成的肝脏损害、修复受损的肝脏组织,有明显的利胆保肝作用。2.利胆合剂高剂量组、利胆合剂低剂量组、熊去氧胆酸组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA表达水平均显著高于模型组;利胆合剂高剂量组、利胆合剂低剂量组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA表达水平显著高于熊去氧胆酸组;且利胆合剂高剂量组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA表达水平均高于利胆合剂低剂量组。3.利胆合剂高剂量组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP蛋白表达水平高于熊去氧胆酸组,利胆合剂低剂量组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP蛋白表达水平与熊去氧胆酸组相比两者无显著差异;且利胆合剂高剂量组SHP、UGT2B4蛋白表达水平显著高于利胆合剂低剂量组。结论:利胆合剂对ANIT诱导的急性肝内胆汁淤积模型幼龄大鼠具有保肝利胆的功效,对胆汁淤积及其引起的肝损害有明显的治疗作用,其机制可能为利胆合剂通过干预FXR上调SHP、UGT2B4、BSEP mRNA及蛋白的表达来促进胆汁酸在肝内的排泄,修复胆汁淤积引起的肝损害。
【学位授予单位】：湖北中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R272
【图文】：

胆汁酸,中西医,婴儿

图 2 FXR 调节胆汁酸代谢图第二部分利胆合剂基于 FXR 调节胆汁酸代谢的实验研究实验将根据婴儿胆汁淤积性肝病的中西医临床基础建立较为对应的幼龄大鼠模型，研究利胆合剂对 FXRSHP、UGT2B4、BSEP 基因及蛋白表达

水平柱,生化指标,中央静脉,形态学

各组大鼠血清生化指标水平柱状图

苏木精-伊红染色,肝细胞,碎片状坏死,中央静脉

图 4：各组大鼠肝脏病理表现（苏木精-伊红染色，x200）注：正常组：肝细胞围绕中央静脉呈放射状排列，肝细胞及汇管区未见明显异常；模型组：肝细胞弥漫脂肪变性，部分肝细胞嗜酸性变，并见碎片状坏死( )，汇管区纤维组织增生及炎

【参考文献】