慢性乙型肝炎儿童HBeAg血清学不同临床转归的宿主免疫学特点和儿童肝生化指标性别、年龄特异性参考区间的建立及其在慢性乙型

发布时间：2020-08-09 15:38

【摘要】：第一部分慢性乙型肝炎儿童HBe Ag血清学发生不同临床转归的宿主免疫学特点目的:分析HBe Ag阳性慢性乙型肝炎儿童HBe Ag血清学发生不同临床转归的免疫学特点,筛选与其相关的关键免疫学指标以区分出不同的HBe Ag临床结局,为慢性乙型肝炎儿童的随访监测、治疗效果判断提供新的视角。方法:纳入15名HBe Ag阳性慢性乙型肝炎儿童,平均随访2.8年(范围:0.7-6.2年)。研究结束时根据HBe Ag血清学的状态将研究对象分为三组:自发性HBe Ag清除/转换组(Group1,n=5)、持续性HBe Ag阳性组(Group2,n=5)和抗病毒药物诱导的HBe Ag血清学转换组(Group3,n=5)。收集血清检测其肝功能、乙肝标志物及HBV-DNA载量等临床指标并采用半定量芯片检测IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6、TGF-β、IL-10、IL-17、IL-22和IL-21等34种细胞因子表达谱。通过检测各组患儿在不同时间点相关细胞因子表达水平,比较与分析其组间差异及其动态变化。应用布尔模型探讨细胞因子与HBe Ag不同临床转归之间的关系,并筛选能区分HBe Ag不同临床转归的关键免疫学指标。结果:自发性HBe Ag血清学清除/转换组(Group1)的细胞因子表达模式的总体水平较低。抗病毒药物诱导的HBe Ag血清学转换组(Group3)细胞因子表达水平最高,且在抗病毒治疗发生HBe Ag血清学转换后细胞因子表达水平仍较高。在基线时,Group3的IL-1b、IL-6R、IL-17F、IL-21R、MIP-3α及IL-17R、IL-22、IL-28A、GITR的表达水平明显高于其他两组。在随访结束时,Group3的IL-1b、IL-6R、IL-23p19、IL-28A、MIP-3α的表达水平要明显高于其他两组。持续性HBe Ag阳性组(Group2)的IL-1s RⅠ、IL-1s RⅡ、IL-4、IL-12p40、IL-17F、GITR以及TGF-β3的表达水平随时间进展显著升高。基线GITR、IL-22、IL-21R、IL-17R的表达水平能够较好地区分血清HBe Ag不同的临床转归。此外,进一步通过基线GITR、IL-21R的表达情况建立可以判断慢乙肝儿童HBe Ag不同临床结局的简易流程。结论:HBe Ag阳性慢性乙型肝炎儿童发生不同临床转归时宿主细胞因子的表达水平有较大差异,细胞因子表达的总体模式能更好地反映其免疫特征。通过联合基线GITR、IL-22、IL-21R、IL-17R的表达水平,能够较好地区分血清HBe Ag发生不同临床转归的慢性乙型肝炎儿童,并建立了基于基线GITR和IL-21R表达情况的简易流程来判断HBe Ag阳性慢性乙型肝炎儿童血清HBe Ag的临床转归。第二部分儿童血清ALT、AST、AKP、GGT的性别和年龄特异性参考区间的建立及其在慢性乙型肝炎自然史中的应用目的:建立儿童血清ALT,AST,AKP和GGT的性别和年龄特异性参考区间,并利用新的ALT正常值上限(upper limits of normal,ULN)重新评估儿童慢性乙型肝炎自然史。方法:从医院电子数据库系统收集1-14岁健康儿童的年龄、性别及肝生化学等信息。利用百分位数(第3位百分位数-第97位百分位数)确定血清ALT,AST,AKP和GGT年龄和性别特异性的参考区间。计算灵敏度和特异度判断新提出的ALT ULN检出慢性HBV感染儿童的能力。结果:基于4232名健康儿童的肝生化学指标检测结果,我们建立了ALT,AST,AKP和GGT年龄和性别特异性的参考区间。与现在的ALT ULN相比,新的ALT阈值区分慢性HBV感染儿童的灵敏度更高(男孩:31.2%,女孩:35.5%),而特异度仅略有下降。HBe Ag(+)慢性感染期儿童的肝生化学指标水平随年龄、性别的变化趋势与健康儿童大致相同,但仍存在一些差异。根据新提出的ALT ULN,大约16.1%的男孩和19.0%的女孩被划分为HBe Ag(+)慢性肝炎期,但使用目前的ALT ULN,他们被认为处于HBe Ag(+)慢性感染期。结论:基于大样本健康儿童人群,我们建立了儿童ALT,AST,AKP和GGT性别和年龄特异性的参考区间。同时,我们描述了HBe Ag(+)慢性感染期患儿的血清肝生化指标水平的特征。并且,新提出的肝生化学指标的参考区间将有助于我们了解健康儿童及HBe Ag(+)慢性感染期儿童的肝功能特征和慢性HBV感染患儿的自然史。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R725.1
【图文】：

患儿,细胞因子表达,慢性乙型肝炎,细胞因子

Male/Female，n 4/1 4/1 2/3HBV DNA ，log10IU/ml，mean（SD）3.4 (0.8) 7.3 (0.4) 2.7 (0.0)ALT，U/L，mean（SD） 21.8 (12.3) 21.7 (9.4) 37.0 (12.4)ALT level ＞ ULN，n 0 0 1注：T1 代表基线，T2 代表随访结束时。3.2 慢性乙型肝炎儿童细胞因子的表达水平及其动态变化3.2.1 慢性乙型肝炎儿童的细胞因子表达概况基于细胞因子芯片方法，我们同时检测了所有纳入研究的患儿血清中的 34 种相关细胞因子。我们首先利用 Heatmap Illustrator 软件将所有细胞因子表达水平转换为热图（图 1）。

柱状图,细胞因子,患儿,表达水平

图 2. 各组患儿在不同时间点各细胞因子的平均表达水平。该柱状图显示了不同组别，在 T1与 T2 两个时间点各个细胞因子的平均表达水平。其中横坐标为各细胞因子名称，纵坐标为细胞因子半定量检测值。Figure 2. Average expression levels of cytokines in different groups and at different time points.The histogram shows the average expression levels of cytokines at T1 and T2 for differentgroups. The abscissa indicates the name of each cytokine, and the ordinate indicates thesemi-quantitative detection value of cytokines.3.2.2 纵向比较分析各组慢性乙型肝炎儿童的细胞因子表达水平的动态变化我们对每一组患儿在 T1、T2 时间点的各个细胞因子进行比较之后发现，在HBeAg 状态发生变化的两组中，即 Group1、Group3 的各种干扰素、促炎细胞因子、免疫调节细胞因子、T 细胞和自然杀伤（NK）细胞衍生的细胞因子等均未发现显著差异。然而在 Group2 中，有 7 种检测的细胞因子在两个不同时间点之间的表达存在显著差异，分别为 IL-1sRⅠ、IL-1sRⅡ、IL-4、IL-12p40、IL-17F、GITR 以及

细胞因子,差异表达,时间点,细胞因子表达

图 3. Group2 在 T1、T2 时间点之间明显差异表达的细胞因子。横坐标为不同的时间点，纵坐标为细胞因子测量值的 Log2 对数值。* P<0.05; ** P<0.01。Figure 3. Cytokines that were significantly differentially expressed between T1 and T2 inGroup2. The abscissa represents the different time points and the ordinate represents the Loglogarithm of the cytokine measurements. * P <0.05; ** P <0.013.2.3 横向比较分析各组慢性乙型肝炎儿童细胞因子的表达差异上述结果分析了同组别中 T1、T2 时间点之间细胞因子表达水平的动态变化，主要阐述了 Group1、Group2 及 Group3 的患儿在经历不同临床状态转换的前后，细胞因子的表达水平有无显著差异及差异情况。接下来我们横向比较分析了不同组细胞因子的表达水平。在 T1 时，Group1 与 Group2 之间所有细胞因子表达水平均未发现统计学差异而在 Group1 中 IL-17R、IL-22、IL-28A、GITR 的表达水平要显著低于 Group3，

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