多重连接探针扩增法（MLPA）诊断单纯性圆锥动脉干畸形22q11.2微缺失率研究

发布时间：2020-09-22 19:11

　　 目的： 本研究拟对MLPA诊断染色体22q11.2微缺失结果进行评价,并应用MLPA探讨单纯性圆锥动脉干畸形染色体22q11.2微缺失的发生率。 方法： 应用MLPA及FISH两种方法分别检测了32例儿童(16名男孩,16名女孩；年龄1-13岁,平均3.6±3.1岁)外周血样本,其中,16例为已被诊断为染色体22q11.2微缺失患儿(阳性对照组),16例为体检正常儿童(阴性对照组)。采用灵敏度,特异度及Kappa分析来评估结果。其次,MLPA对77例0-10岁单纯性圆锥动脉干畸形(CTD)患儿进行染色体22q11.2微缺失筛查,并对阳性样本进行荧光原位杂交(FISH)验证。采用Fisher精度检验,P0.05有统计学意义。 结果： MLPA检测32例样本中,16例阳性对照样本均有染色体22q11.2微缺失,且缺失片段长度约3-Mb；16例阴性对照样本中未发现22号染色体缺失。FISH证实了16例22q11.2微缺失患儿均存在22号染色体缺失,16例阴性对照样本不存在缺失。因此,MLPA诊断染色体22q11.2微缺失的灵敏度及特异度高。 MLPA对77例单纯性CTD患儿进行了22号染色体微缺失筛查,其中55例为法洛四联症(TOF),4例室间隔缺损型肺动脉闭锁(PA-VSD),8例右室双出口(DORV),10例大动脉转位(TGA)。6例(7.8%)患儿存在染色体22q11.2微缺失,其中4例为TOF,1例为PA-VSD,1例为DORV;10例TGA患儿中均未发现22q11.2缺失。 结论： 1.MLPA是一种快速、可靠、高通量及相对经济的诊断染色体22q11.2微缺失的有效方法,弥补了FISH技术的不足,可用于临床实验室快速诊断染色体22q11.2微缺失,具有较高的临床诊断价值。 2.单纯性CTD染色体22q11.2微缺失发生率约为7.8%。单纯性CTD患儿中,PA-VSD, DORV及TOF比TGA更易发生染色体22q11.2微缺失。临床医师应加强对单纯性CTD患儿的遗传筛查及咨询。
【学位单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2011
【中图分类】：R725.4
【部分图文】：

9q34和 17pl3等。与本研究密切相关的14个MLPA探针分布于“典型缺失’·区，其与FISH探针的相对位置模式图，如图3一1。耸q，唯JAPp蒯ma妞扮1‘翎.户.曰目...曰悦...曰..LCR名于Ae{「 !SHPmh既 MLPAPfo幻舫:N25JDZ之 :CLTCLICDC:川RA谁2325泊22572翔13.3仁G户1日BT日大1以洲ST日义ITx45石7O6C舫:NRDZ{KLHL22ZN户7月1O陀QAp12以丫Rl14图3一 1LcRs、FlsH探针及MLPA探针在染色体22qll.2相对位置结构示意图。黑条表示 22ql1.2微缺失综合征常见缺失片段大小(3一Mb和 1.5一Mb)。数字表示14个MLPA探针相对位置。经典缺失片段(3一Mb)包括LcRsA一LCRsD以及14个MLPA探针 (CLTcLI一LzTRI);近端缺失片段 (l.SMb)包含LcRsA一B、9个MLPA探针(e耳eLI一ooeRS)及FISH检测探针 (N25022575)。 FxSH对照探针22ql3.3位于染色体 22ql1.2以外区域。LCRs:低拷贝重复序列;FISH:荧光原位杂交;ML队:多重连接探针扩增法。本研究所选用MLPA试剂盒探针具体信息如下表3一1:

D一fragments探针峰高仅稍微比 55ntD一丘铭ments探针和 96niD一丘agments探针的峰高“低”一点，且ML队检测探针峰高远“高于”DNA质量控制探针峰高，说明MLPA反应的探针连接、杂交等过程均成功(如图4一l)。图4一 1ML队探针毛细管电泳结果示意图。图示一个成功的男性患儿样本ML队反应，4个oNA质量控制探针(Q一fr吧ments:64一70一76一52)峰高均明显“低于”其余检测探针峰高;3个ML队反应过程质量控制探针(D一fragmenis:88一92一96)均可见， 92niD一fragmenis探针峰高稍低于比 88niD一fragmenis探针和96niD一fragments探针的峰高;性别判定探针 (100一 105nt)显示该样本为男性。其余48个ML队探针峰高均合理分布，且高于4个DNA质量控制探针峰高。根据探针相对基因拷贝数比值结果分析，发生缺失的探针的峰高/锋面积应比正常对照探针的峰高/锋面积低约30一50%。

浙江大学硕十学位沦文第部分 {{{{{}}}七七玉 玉 }}}JJJbbb翩 翩翩 翩 444)))佩 佩咖咖血 血即 即 即即 即 即 即 即 即乞 乞乞石右蔺阿、胡胡l函习 }}}卜衬万万 ...，、.日翻翻 翻 翻翻翻翻翻 jjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjjj颐 颐 习习1..，皿‘ ‘ ‘ 图4一 2MLPA诊断1例染色体22qll.2微缺失综合征样本(a)和1例正常对照样本(b)毛细管电泳图。扩增后ML队探针(1一14号)相对基因拷贝数峰高/峰面积(a，箭头所示)比正常对照样本(b，箭头所示)探针相对基因拷贝数峰高/峰面积降低30%一50%。4·ZMLPA和FlsH诊断结果FlsH检测32例样本中，16例阳性对照样本均有染色体22qll.2微缺失，另外16例阴性对照不存在缺失。经ML队检测后发现，16例阳性样本探针比值(0.594士0.075)，远小于正常对照样本探针比值(p<0.05)，提示均存在染色体22qll.2微缺失

【共引文献】

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本文编号：2824805