新生鼠肾积水病肾损害程度的检测及临床意义

发布时间：2020-09-29 13:46

　　 目的：通过腰大肌压迫输尿管法,建立生后48小时内的新生Wistar鼠肾积水动物模型,检测输尿管梗阻期间及梗阻解除后病肾组织和肾盂尿中一系列细胞因子：如转化生长因子-β1(TGF-β1)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、胰岛素样生长因子-1 (IGF-1)、内皮素-1(ET-1)转录水平和蛋白水平表达的改变,以及尿中含量的变化,拟从分子水平探寻评定先天性肾积水术前病肾损害程度以及术后病肾恢复的客观、可靠指标,为临床小儿肾积水治疗方法的选择及术后疗效预测提供实验依据。 方法： 1、动物模型制作：建立先天性肾积水的动物模型(即腰大肌压迫输尿管法制作部分输尿管梗阻及梗阻解除的动物模型)。取生后48h内的新生Wistar鼠72只,随机分6组,每组12只；随机选择1组行假手术,作为对照组,余5组用腰大肌压迫法制作左侧部分输尿管梗阻模型,然后再随机分为组2-组6。组1(对照组)：假手术组；组2：梗阻后3周处死；组3：梗阻后3周解除梗阻,解除梗阻后2周处死；组4：梗阻后3周解除梗阻,解除梗阻后6周处死；组5：梗阻后3周解除梗阻,解除梗阻后8周处死；组6：梗阻后3周解除梗阻,解除梗阻后12周处死。 2、实验指标的检测：(1)、HE染色行病肾组织结构改变的检查,并做病理分级；(2)、检测病肾组织TGF-β1、MCP-1、ET-1、IGF-1转录水平和蛋白水平在梗阻期间及梗阻解除后的改变；(3)、检测病肾尿TGF-β1、MCP-1、ET-1、IGF-1在梗阻期间及梗阻解除后的变化。 结果： 1、新生鼠梗阻性肾积水动物模型成功建立,病肾组织经HE染色后,参照Elder等的标准进行病理分级,对照组12例全部为Ⅰ级,实验组(死亡9例,存活51例)Ⅰ级7例,Ⅱ级13例,Ⅲ级20例,Ⅳ级11例,Ⅴ级0例；病肾组织结构改变随梗阻解除时间延长而逐渐恢复。 2、病肾组织内TGF-β1、MCP-1、ET-1、IGF-1转录水平及蛋白水平的表达变化： (1)、TGF-β1、MCP-1、ET-1 mRNA的表达在梗阻后随病理分级的增加而递增,其中TGF-β1在各病理分级组间比较,差异均有统计学意义(P0.05), MCP-1、ET-1在不同病理分级组间比较,差异不全有统计学意义；IGF-1虽随病理分级的增加而递减,但在各病理分级组间比较,差异不全有统计学意义。TGF-β1、MCP-1、ET-1蛋白水平的表达也随病理分级的增加而递增,而IGF-1则随病理分级的增加而递减。 (2)、梗阻解除后,随梗阻解除时间的延长TGF-β1、MCP-1、ET-1转录水平及蛋白水平的表达逐渐下降,其中梗阻解除后12周TGF-β1水平已降至正常,而IGF-1转录水平及蛋白水平的表达则逐渐升高。 3、病肾肾盂尿内TGF-β1、MCP-1、ET-1及IGF-1水平的改变： (1)、病肾尿TGF-β1、MCP-1、ET-1在梗阻后随病理分级的增加而递增,其中TGF-β1在各病理分级组间比较,差异均有统计学意义(P0.05), MCP-1、ET-1在不同病理分级组间比较,差异不全有统计学意义；IGF-1虽随病理分级的增加而递减,但在各病理分级组间比较,不全有统计学意义。 (2)、梗阻解除后,随梗阻解除时间的延长病肾尿TGF-β、MCP-1、ET-1的含量逐渐升高,其中梗阻解除后12周尿TGF-β1水平已降至正常,而尿IGF-1的含量则随梗阻解除时间的延长逐渐下降。 结论： 1、本研究通过腰大肌压迫输尿管法成功地制作了新生鼠肾积水的动物模型(新生鼠部分输尿管梗阻建立及梗阻解除的动物模型),可作为临床研究小儿肾积水的理想动物模型。 2、新生鼠肾积水病肾组织TGF-β1转录水平及蛋白水平在各病理分级组间比较,差异均有统计学意义,且在梗阻解除术后12周已降至正常,可用于判定病肾的损害程度以及恢复情况。 3、新生鼠肾积水病肾尿TGF-β1在梗阻后各病理分级组间比较,差异均有统计学意义,且在梗阻解除术后12周已恢复至正常,是评定肾积水动物摸型病肾损害及恢复的理想指标。
【学位单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2010
【中图分类】：R726.9
【部分图文】：

Reai一timePCR反应原理

(l)取透明胶带将洗净、晾干的制胶板的两(2)在固定位置放好梳子;(3)称取0.39琼脂糖于 30nil0.5又TBE中，却至60℃左右时倒入制胶板中:(4)待凝胶凝固后，垂直拔去梳子，取下胶(5)将DNA样品与澳酚蓝混合后用10林l微ddHZo3林l+嗅酚蓝2林l共10林l于o.SInlEp管(6)将制胶板放入电泳槽中，加入电泳液，向正极泳动;(7)电泳完成后，取出凝胶，放入0.5林g/m 清水漂洗后置于紫外透射仪上观察电泳结果，相记录(见图2)。

染色并参照Elder等[’4]的标准进行病W级11例，V级0例。在不同病理分级组中，TGF一pl、McP一1、ET-1及IGF一lmRNA表达水平见表4及图3一6。荧光定量PCR检测结果显示:MCP一1、TGF一pl、 ET-1mRNA的表达在梗阻后随病理分级的增加而递增，其中TGF一plmRNA在各病理分级组间比较，差异有统计学意义(P<0.05)，MCP一1、 ET-1mRNA在不同病理分级组间比较，差异不全有统计学意义(MCP一 1mRNA的表达在l、11级间无统计学意义， ET-1mRNA在11、111级间比较差异无统计学意义);23

【参考文献】

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1 马洪;方勇;田文超;刘斌;杨俊杰;李静;张伟同;周永正;;肾积水患儿病肾肾组织胰岛素样生长因子、内皮素、转化生长因子及单核细胞趋化蛋白表达变化的意义[J];实用儿科临床杂志;2009年23期

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本文编号：2829803