ω-3多不饱和脂肪酸对脓毒症炎症免疫和临床效果的研究

发布时间：2020-10-30 02:37

　　 背景:脓毒症是人体对感染的压倒性和危及生命的反应,可导致组织损伤、器官衰竭和死亡。全球估计每年有3150万脓毒症和1940万严重脓毒症病例,可能有530万人死亡。儿童脓毒症患病率逐年上升,与成人相当,多中心调查发现PICU病区儿童脓毒症患病率平均为8.2%,死亡率在5%到40%之间,儿科重症监护病房(PICU)约25%的死亡与严重感染有关,病死率高达17%。尽管近年对脓毒症的发病原因、疾病转归机制、临床症状和体征特点的认识不断提高、各种治疗和支持技术不断进步,但到目前为止,脓毒症的形成加重机制仍不明确,特异有效的治疗手段有限,未能控制疾病加重甚至死亡的过程,病死率仍高达30%~70%。炎症反应及免疫功能紊乱是脓毒症的主要病理生理过程,与疾病的发生和发展直接相关,促炎因子和抗炎因子交互抗衡是脓毒症发生发展的关键所在。促炎因子的大量释放引发机体炎症风暴,抗炎因子释放和淋巴细胞凋亡造成免疫系统疲惫,发生免疫抑制或无能。ω-3多不饱和脂肪酸包括二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA),主要存在于海洋生物(包括鱼油)产品中,除了可以为机体提供能量和营养物质,还具有抗血栓、调节免疫、调节脂肪代谢、调节基因表达等作用,应用于脓毒症疾病,可能起到抑制炎症、调节免疫、改善细胞免疫功能的作用,进而有助于控制感染,改善预后。目前,ω-3多不饱和脂肪酸在脓毒症中治疗效应已得到越来越多的关注,但治疗效果不一致,还存在许多问题,如时机选择、量效关系及临床应用疗程等,期待进一步的研究。第一部分:ω-3多不饱和脂肪酸对脓毒症大鼠淋巴细胞凋亡率和炎症因子的影响目的探讨ω-3多不饱和脂肪酸对脓毒症大鼠血清炎症因子和胸腺与脾脏淋巴细胞凋亡的影响。方法将80只7~8周龄雌性Sprague-Dawley大鼠随机分成ω-3PUFAs低剂量治疗组(每日0.1g/kg,n=8)、ω-3PUFAs中剂量治疗组(每日0.2g/kg,n=8)、ω-3PUFAs高剂量治疗组(每日0.3g/kg,n=8)、模型组和传统脂肪乳剂组(每日0.1g/kg,n=8)。采用盲肠结扎穿孔法建立脓毒症大鼠模型,造模后各治疗组分别给予脂肪乳剂和不同剂量ω-3PUFAs葡萄糖稀释液尾静脉注射给药,模型组予等量葡萄糖注射液尾静脉注射。按处死时间将各组大鼠随机分为24h和72h两个亚组,每组8只大鼠。采用苏木精-伊红染色观察各组大鼠胸腺和脾脏的病理改变;采用TUNEL检测各组大鼠脾脏和胸腺淋巴细胞凋亡率;采用ELISA检测血清炎症因子的水平。结果盲肠结扎穿孔法术后,大鼠出现精神倦怠、活动减少、寒战蜷缩、腹胀、眼角分泌物增多、竖毛以及低体温等表现,处死后发现大鼠空肠肠管胀气,腹腔有较多血性积液,盲肠出现肿胀坏死、发黑、黏连等表现。不同剂量ω-3PUFAs组大鼠胸腺小叶结构完整,皮髓质结构清晰,模型组和传统脂肪乳剂组皮髓质界限不清,淋巴细胞明显减少;ω-3PUFAs组脾脏红髓和白髓结构尚能保持,可见脾小结存在,而模型组和传统脂肪乳剂组红髓和白髓结构紊乱,脾小结明显缩小或消失。各剂量ω-3PUFAs治疗组24h IL-6、IL-8和72h TNF-a、IL-6水平均较模型组、传统脂肪乳剂组显著降低(P0.01);ω-3PUFAs 0.2g/kg中剂量治疗组血清炎性介质TNF-a、IL-6、IL-8水平均较模型组、传统脂肪乳剂组显著降低(P0.01);ω-3PUFAs 0.3g/kg高剂量治疗组血清炎性介质TNF-a、IL-6、IL-8、IL-10水平均较模型组、传统脂肪乳剂组显著降低(P0.01);ω-3PUFAs 0.3g/kg高剂量治疗组大鼠24h、72h TNF-a和IL-6水平较ω-3PUFAs 0.1g/kg低剂量治疗组显著降低(P0.01);24hω-3PUFAs 0.2g/kg中剂量治疗组、ω-3PUFAs 0.3g/kg高剂量IL-8水平较ω-3PUFAs 0.1g/kg低剂量治疗组显著降低、ω-3PUFAs 0.3g/kg高剂量治疗组较ω-3PUFAs 0.2g/kg中剂量治疗组显著降低(P0.01);不同剂量ω-3PUFAs组24h和72h胸腺和脾脏淋巴细胞凋亡率均较模型组、传统脂肪乳剂组显著降低(P0.01),并且ω-3PUFAs 0.3g/kg高剂量治疗组24h和72h脾脏淋巴细胞凋亡率均较ω-3PUFAs 0.1g/kg低剂量治疗组显著降低(P0.05或P0.01)。结论ω-3多不饱和脂肪酸有减轻脓毒症大鼠血清炎症因子和胸腺与脾脏淋巴细胞凋亡的作用且呈与剂量效应,高剂量ω-3PUFAs(0.3g/kg)治疗组效果最佳。第二部分:ω-3多不饱和脂肪酸治疗脓毒症患儿的临床效果目的观察ω-3多不饱和脂肪酸对脓毒症患儿感染、血液动力学、氧合、肝肾功能、心肌损害和心功能、乳酸清除率、病情危重度及炎症因子指标的影响。方法根据儿科脓毒症诊断标准选择2014年6月~2018年5月收治我科的脓毒症患儿87例并按随机数字法分为2组,即对照组45例和ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3polyunsaturated fatty acids,ω-3PUFAs)治疗组42例。对照组在常规治疗的基础上在患儿入院6小时内同时应用普通脂肪乳剂(intralipid,20%脂肪乳)5ml/kg.d,ω-3PUFAs组在常规治疗的基础上同时应用多种油脂脂肪乳(鱼油,商品名合文)5ml/kg.d,所有病例连续治疗7天以上。两组之间的比较:选取入院第一个24小时内和治疗第7d的最差值分别进行小儿危重病例评分(pediatric critical illness score,PCIS)和第三代儿童死亡风险评分(pediatric risk of mortality III,PRISMⅢ);治疗的0h和6h测定患儿乳酸水平,并计算早期乳酸清除率;治疗前和治疗7d后检测患儿的感染指标WBC、CRP、PCT;血流动力学和氧合指标MAP、Pa O2/Fi O2;肝肾功能指标ALT、TBIL、ALB、Cr;心肌损害和心功能指标CK-MB、Tn I、BNP;治疗的0h、72h、7d测定患儿外周血炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10的活化水平。结果两组患儿入院时的性别、年龄、体重、疾病种类、乳酸水平、小儿危重病例评分、PRISMⅢ评分比较,差异无统计学意义(P0.05);治疗前两组血常规、血流动力学、氧合、肝肾功能、心肌损害和心功能指标,两组之间进行比较无统计学意义(P0.05);治疗至6h后ω-3PUFAs组乳酸显著低于对照组(P0.05)、乳酸清除率显著高于对照组(P0.01)。治疗7d后感染指标WBC、CRP、PCT两组患者感染状况均有所缓解,但ω-3PUFAs组患者的WBC、CRP、PCT水平均显著低于对照组(P0.01);治疗7d后血流动力学、氧合指数、肝肾功能、心肌损害和心功能指标,两组无统计学差异(P0.05);治疗7d后两组PRISMⅢ评分均有所下降、PCIS评分均有所升高,但ω-3PUFAs组PCIS评分显著高于对照组(P0.01);ω-3PUFAs组和对照组脓毒症期患儿在治疗前,两组TNF-a,IL-1β、IL-6、IL-10水平均无统计学差异(P均0.05);而在治疗72hω-3PUFAs组的炎症指标TNF-a水平要低于对照组(P0.05);治疗7dω-3PUFAs组的炎症指标TNF-a(50.69±9.38)、IL-6(114.84±26.89)、IL-10(66.87±15.47)水平明显低于对照组(P0.01或P0.05)。结论ω-3多不饱和脂肪酸辅助治疗儿童脓毒症有一定的临床疗效,其机制可能与减轻脓毒症过程中的炎症反应有关。
【学位单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R720.597
【部分图文】：

23图 1 各组大鼠脾脏 24h 和 72h 病理变化典型图谱（苏木精-伊红染色，×模型组和传统脂肪乳剂组脾脏红髓和白髓结构紊乱，界限不清（红色箭头）小结明显缩小甚至消失，淋巴细胞减少（黑色箭头）；ω-3PUFAs 低剂量、量和高剂量治疗组红髓和白髓结构较完整，脾小结存在（白色箭头

24图 2 各组大鼠胸腺 24h 和 72h 病理变化典型图谱（×200） 模型组和传统乳剂组胸腺小叶结构欠完整，皮质变薄，皮髓质结构不清，淋巴细胞明显（黑色箭头）；ω-3PUFAs 低剂量、中剂量和高剂量治疗组胸腺小叶结构完皮髓质结构清晰，淋巴细胞增多（白色箭头）。

25图 3 大鼠脾脏和胸腺淋巴细胞凋亡 TUNEL 典型图谱（×400） 模型组和传统脂肪乳剂组脾脏红髓和白髓结构紊乱，界限不清(白色箭头)，脾小结明显缩小甚至消失(蓝色箭头)，淋巴细胞减少(黑色箭头)；ω-3PUFAs 低剂量治疗组红髓和白髓结构较完整，脾小结存在。模型组和传统脂肪乳剂组胸腺小叶结构较完整，但皮髓质结构不清，淋巴细胞明显减少；ω-3PUFAs 低剂量治疗组胸腺小叶结构保持，且皮髓质结构清晰。
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本文编号：2861853