先天性中性粒细胞减少症临床特征、基因突变分析及乙肝病毒X蛋白对HEK 293细胞的独特作用研究

发布时间：2017-08-16 19:06

  本文关键词：先天性中性粒细胞减少症临床特征、基因突变分析及乙肝病毒X蛋白对HEK 293细胞的独特作用研究

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【摘要】：第一部分:先天性中性粒细胞缺陷病临床表现特征及其基因突变分析目的:通过对临床上发现的粒细胞降低的病人在排除了后天因素后,进行对相关基因测序检测相关基因来确诊先天性中性粒细胞减少症,从而进行指导患者的治疗。方法:利用血常规,骨髓穿刺染色,ANCA,提取患儿及其父母的核酸,对ELANE基因进行扩增,测定PCR产物,对ELANE基因突变分析及TA克隆后突变分析后确定诊断结果:11例疑诊患儿都有反复的感染(皮肤软组织,肺部,空腔等),非感染性症状有贫血等。ELANE基因突变病人9例,CD4OL突变2例,其中5例新发突变如下:P1 4 exon F c.367-2 ag拼接位点突变,可能RNA剪接会受到影响,未见相关文献报道;P1 5 exon F c.655GA p.Val219Ile已有相关文献报道;P1父亲5 exon F c.655GA p.Val219Ile已有相关文献报道,该病是常染色体的显性遗传病,按照先前的报道其父亲的突变的位点也为致病性的突变,但是实际上父亲身体健康,各种指标均正常,此处与以往的报道不符;P2 3 exon F c.366+10拼接位点插入片段AGAATCTCCAGGT未见相关文献报道;P3 4 exon F c.368 TA p.Leu123His未见相关文献报道;P4 5 exon F c.608GC p.Gly203Asp已有相关文献报道;P5 1 exon F c.16ca SNP未有相关文献报道;P6 2 exon F c.125 CT p.Pro42Leu已有相关文献报道;P6 4 exon F g.855322 CA SNP已有相关文献报道;P7 4 exon F c.568 GA p.Val190Met已有相关文献报道;P8 5 exon F c.669 CA p.Cys223X已有相关文献报道;P9 4 exon F c.597 CT p.FF SNP未有相关文献报道;P9父亲4 exon F c.597 CT p.FF未有相关文献报道;P9 4 exon F c.164 GA p.Cys55Thr已有相关文献报道;CD40L基因突变2例:P10 CD40L c.156+1 GT拼接位点纯合突变已有相关文献报道;P11 CD40L c.156+1 GT拼接位点纯合突变已有相关文献报道结论:通过基因测序突变分析,发现了一些没有被报道过的基因突变类型,扩充的基因突变库的突变种类。基因工程制备的人的重组在中性粒细胞集落刺激因子(G-CSF)可以有效的预防患儿致死性严重性的感染的药物。中性粒细胞的绝对数量在0.5×109以下或者有严重感染的患者建议使用G-CSF,可减少病死率,提高患儿的生存时间。第二部分乙肝病毒X蛋白对HEK 293细胞的独特作用目的:探索乙肝病毒X蛋白对HEK 293细胞的独特作用揭示其作用的相关机制。方法:使用流式相关技术,检测EGFP-N3(HEK 293)和EGFP-N3-HBx(HEK293-HBx)细胞的细胞增殖及各细胞分裂时期细胞特征;细胞转染的相关技术,展现乙肝病毒X蛋白(HBx)对HEK 293细胞的影响;用western blot检测有关蛋白的表达情况;Real-time PCR测定转染HBx基因细胞中m RNA的实时表达差别情况;组织免疫荧光,观察细胞形态差异。结果:HBx通过使HEK 293细胞之间的间隙融合的方式增强HEK293细胞之间的彼此作用;HBx通过增强表达Src蛋白超家族增强E钙粘蛋白的表达,转染了HBx的HEK 293细胞中β-连环蛋白明显增加;HBx通过加强细胞周期蛋白(CDK4)的表达使G2/S期的HEK 293细胞的数量增多;HBx通过提高Bcl2基因的表达量促进细胞增殖,抑制或阻止细胞的凋亡。结论:HBx具有促进细胞的增殖和分化,抑制细胞的凋亡,HBx基因在HEK 293细胞中的功能具有多样性。
【关键词】：先天性中性粒细胞减少症 弹性蛋白酶 SCN ELANE 乙肝病毒X蛋白(HBx) HBV基因X HEK 293细胞 泛素连接蛋白酶复合体
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R725
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-6
• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-14
• 第一部分 先天性中性粒细胞缺陷病的临床表现特征及其基因突变分析14-30
• 前言14-16
• 1 材料和方法16-21
• 2 结果21-24
• 3 讨论24-25
• 4 结论25-26
• 参考文献26-30
• 第二部分 乙肝病毒X蛋白对HEK 293 细胞独特作用的研究30-43
• 前言30-31
• 1 材料和方法31-33
• 2 结果33-39
• 3 讨论39-40
• 参考文献40-43
• 全文总结43-44
• 文献综述44-51
• 参考文献48-51
• 致谢51-52
• 攻读硕士学位期间发表文章及参加学术活动52

【参考文献】

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1 Juergen Beck;Michael Nassal;;Hepatitis B virus replication[J];World Journal of Gastroenterology;2007年01期

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本文编号：684977