脂多糖体外刺激对未成熟星形胶质细胞氧化损伤的机制研究

发布时间：2017-09-29 19:25

  本文关键词：脂多糖体外刺激对未成熟星形胶质细胞氧化损伤的机制研究

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【摘要】：脑白质损伤是早产儿脑损伤的主要类型。其病理特点主要是反应性星形胶质细胞胶质化、小胶质细胞浸润、少突胶质细胞损伤和髓鞘损害及轴突损伤等。流行病学研究表明,宫内感染在早产儿脑白质损伤的发生机制中起了重要的作用。宫内感染导致脑白质损伤,其不仅仅是少突胶质细胞损伤的过程,星形胶质细胞在疾病的发生发展中也发挥了重要的作用。星形胶质细胞氧化损伤在脑白质损伤的发生机制中可能有重要作用,但感染／炎症是否导致未成熟星形胶质细胞的氧化损伤及其机制尚不清楚。因此,本研究通过星形胶质细胞培养,研究脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)体外刺激对未成熟星形胶质细胞的氧化损伤影响,以及星形胶质细胞培养液细胞因子巨噬细胞炎性蛋白-1β(MIP-1β)是否参与这一过程。而且予茶多酚(TP-EGCG)干预,探讨TP-EGCG对LPS体外刺激后未成熟星形胶质细胞氧化损伤的保护作用；以及星形胶质细胞培养液细胞因子MIP-1β是否参与这一过程,为将来脑白质损伤的防治提供理论依据。 目的： 研究LPS体外刺激后未成熟星形胶质细胞的总超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量及细胞因子MIP-1β水平的变化,探讨LPS体外刺激对未成熟星形胶质细胞的氧化损伤作用,以及这一作用是否有细胞因子MIP-1β参与；另外通过予TP-EGCG干预后检测星形胶质细胞总SOD活力、MDA含量、凋亡细胞数与总细胞数的百分比及细胞因子MIP-1β等水平的变化,探讨TP-EGCG是否对LPS体外刺激后星形胶质细胞氧化损伤有保护作用。 方法： 1.星形胶质细胞培养：不同浓度LPS (5μg/mL、10μg/mL)分别刺激不同时间(1天、3天、7天)后,比色法检测星形胶质细胞培养液总SOD活力和MDA含量变化,观察星形胶质细胞氧化损伤情况。ELISA法检测星形胶质细胞培养液细胞因子MIP-1β的浓度变化。 2. TP-EGCG干预：以LPS (5μg/mL)刺激3天,同时予TP-EGCG干预后,比色法检测星形胶质细胞培养液总SOD活力和MDA含量变化,观察星形胶质细胞氧化损伤情况；以LPS (5μg/mL)刺激1天、3天,通过TUNEL法检测凋亡细胞数与总细胞数百分比的变化,观察细胞凋亡情况；ELISA法检测星形胶质细胞培养液细胞因子MIP-1β的浓度变化。 结果： 1. LPS (5μg/mL,分别刺激1天、3天、7天时星形胶质细胞培养液总SOD活力较对照组差异均无显著意义(P0.05)。LPS(5μg/mL)刺激3天时星形胶质细胞培养液MDA含量较对照组明显增加(p0.05); LPS(10mg/mL)刺激1天、3天、7天及LPS (5μg/mL)刺激1天、7天时MDA含量较对照组差异均无显著意义(P0.05)。LPS (5μg/mL)刺激1天和7天、LPS (10μg/mL)刺激1天和3天星形胶质细胞培养液MIP-1β浓度明显降低(P0.05); LPS (5μg/mL)刺激3天、LPS (10μg/mL)刺激7天星形胶质细胞培养液MIP-1β浓度较对照组差异无显著意义(P0.05)。 2.予TP-EGCG干预后刺激3天星形胶质细胞培养液总SOD活力与LPS组及对照组比较明显减少,差异具有显著意义(P0.05)。予TP-EGCG干预后刺激3天星形胶质细胞培养液MDA含量较LPS组比较明显减少(P0.05),但与对照组比较差异不明显(P0.05)。刺激1天时LPS组、LPS+EGCG组与TP-EGCG组之间相比较,星形胶质细胞凋亡细胞数/总细胞数百分比差异无显著意义(P0.05),其与对照组比较差异也无显著意义(P0.05); LPS刺激3天时星形胶质细胞凋亡细胞数/总细胞数百分比较对照组明显增加,差异具有显著意义(P0.05),且予TP-EGCG干预后星形胶质细胞凋亡细胞数/总细胞数百分比较LPS组明显减少,差异具有显著意义(P0.05),TP-EGCG刺激3天与对照组比较,星形胶质细胞凋亡细胞数/总细胞数百分比明显减少,差异具有显著意义(P0.05)。予TP-EGCG干预后刺激3天及单用TP-EGCG刺激3天星形胶质细胞培养液MEP-1β浓度较LPS刺激组及对照组降低均无显著意义。 结论： 1.不同浓度的LPS体外刺激对星形胶质细胞氧化损伤的影响程度可能是不同的。 2. TP-EGCG对星形胶质细胞及LPS体外刺激条件下的星形胶质细胞可能有抗氧化、抗凋亡作用,表明TP-EGCG对LPS体外刺激引起的星形胶质细胞氧化损伤可能有保护作用。
【关键词】：脂多糖 星形胶质细胞 超氧化物歧化酶 丙二醛 茶多酚
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R722.6;R742
【目录】：

• 致谢4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-12
• 目次12-14
• 引言14-16
• 第一部分 脂多糖体外刺激对未成熟星形胶质细胞的氧化损伤机制研究16-31
• 1 前言16-17
• 2 实验材料和方法17-22
• 2.1 材料17-18
• 2.2 方法18-22
• 3 结果22-28
• 3.1 星形胶质细胞的纯化培养22-23
• 3.2 LPS体外刺激对未成熟星形胶质细胞的氧化作用23-24
• 3.3 LPS体外刺激对未成熟星形胶质细胞氧化损伤的影响24-26
• 3.4 ELISA结果26-28
• 4 讨论28-30
• 5 结论30-31
• 第二部分 TP-EGCG对LPS体外刺激时未成熟星形胶质细胞氧化损伤的保护作用机制研究31-51
• 1 前言31-33
• 2 实验材料和方法33-40
• 2.1 材料33-34
• 2.2 方法34-40
• 3 结果40-48
• 3.1 TP-EGCG对LPS体外刺激条件下星形胶质细胞的氧化作用40-41
• 3.2 TP-EGCG对LPS体外刺激条件下星形胶质细胞氧化损伤的保护作用41-42
• 3.3 LPS刺激和TP-EGCG干预不同时间后星形胶质细胞凋亡的变化42-46
• 3.4 TP-EGCG对LPS体外刺激条件下星形胶质细胞MIP-1β浓度的变化46-48
• 4 讨论48-50
• 5 结论50-51
• 全文结论51-52
• 参考文献52-55
• 综述55-62
• 参考文献60-62
• 作者简历及在学期间所取得的科研成果62

【参考文献】

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1 陈惠金;魏克伦;姚裕家;杨于嘉;周丛乐;范秀芳;高喜容;江莲;刘晓红;钱继红;王莉;吴本清;吴高强;张青梅;张小兰;周晓玉;;我国早产儿脑室周围白质软化发生率的多中心调查报告[J];中国当代儿科杂志;2008年06期

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本文编号：943806