冷自体血心脏停搏液对离体兔心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响

发布时间：2017-10-06 20:30

  本文关键词：冷自体血心脏停搏液对离体兔心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响

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【摘要】：目的本研究通过建立离体兔心肌缺血再灌注损伤模型，对比观察冷自体血心脏停搏液、HTK液和STH液对离体兔心肌缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响，探讨冷自体血心脏停搏液对心肌缺血再灌注损伤的心肌保护作用机制。 方法选择健康普通实验级大白兔45只，体重在（2000-2600g），雌雄不拘。随机分为3组：冷自体血心脏停搏液A组（CABC组，n=15）、康斯特液B组（HTK组，n=15）及改良托马斯心脏停搏液C组（STH液组，n=15）。HTK液组和STH液组经开胸后直接于主动脉及肺动脉根部切断取出心脏；CABC组需开胸后于主动脉根部先快速抽血（按晶体母液与血液1∶4比例配置CABC停跳液），抽血完成后立即浸入备好的冰屑中备用。各组兔心脏取出后均以4℃左右的K-H液连接于主动脉根部冲洗（以减少对后期心脏停跳与复跳的影响），然后迅速连接于自制的Langendorff灌注装置，灌注15min左右以达平衡状态为宜；然后各组分别灌注4℃（15ml/kg）的CABC、HTK及STH停搏液使心脏停搏，心脏停搏120min，灌注K-H液使心脏复跳后再灌注30min使其达到平衡状态。实验结束后，快速从灌注装置上取下心脏，剪取心尖部心肌组织（约2×3×3cm大小）后，立即放入4%多聚甲醛固定液中固定48H后，于石蜡包埋切片后行免疫组织化学法和原位缺口末端标记法（TUNEL法）对比观察各组心肌组织细胞的细胞凋亡（细胞核染色后成棕黄色）的变化；应用免疫组织化学法测定心肌细胞凋亡（caspase-3、bax及bcl-2）数及TUNEL法观察凋亡细胞的数量和比例。 结果离体兔心脏经三组不同心脏停搏液灌注后：1、各组Bcl-2蛋白表达百分率组间比较：CABC组与HTK组比较，无明显差异(P0.05)；CABC组与STH组比较，较后者明显增加，具有显著统计学意义(P0.001)；HTK组与STH组比较也有明显增加，具有明显统计学意义(P0.01)。2、各组Bax蛋白表达百分率组间比较：CABC组与HTK组比较，较后者减少不明显，无统计学意义(P0.05)；CABC组与STH组比较，较后者有增加，具有统计学意义(P0.05)；HTK组与STH组比较无明显差异(P0.05)。各组caspase-3蛋白表达百分率组间比较：CABC组与HTK组比较，有统计学意义(P0.05)；CABC组与STH组比较，具有统计学意义(P0.05)；HTK组与STH组比较无明显统计学意义(P0.05)。4、各组凋亡指数（AI值）表达百分率组间比较：CABC组与HTK组比较，无明显差异(P0.05)；CABC组与STH组比较，，CABC组有明显减少，具有明显统计学意义(P0.01)；HTK组与STH组比较，HTK组有明显较少，具有明显统计学意义(P0.01)。 结论1、离体兔心脏缺血再灌注后心肌细胞存在细胞凋亡现象。2、使用冷自体血心脏停搏液与HTK液进行心肌灌注，心肌细胞凋亡明显轻于使用St.Thomas心脏停搏液。3、冷自体血心脏停搏液的心肌保护作用与抑制心肌缺血再灌注期间心肌细胞凋亡有关。
【关键词】：冷自体血心脏停跳液 心肌缺血/再灌注损伤 细胞凋亡 缺血预处理
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R726.5
【目录】：

• 中英文缩略表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-12
• 材料与方法12-14
• 标本采集、制备与检测14-15
• 统计学处理15-16
• 结果16-22
• 讨论22-30
• 结论30-31
• 参考文献31-35
• 综述35-44
• 参考文献41-44
• 答谢44-45
• 作者简介45

【参考文献】

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本文编号：984892