自噬通过Stat3信号通路降低骨髓血细胞DNA的辐射损伤

发布时间：2017-04-25 17:04

  本文关键词：自噬通过Stat3信号通路降低骨髓血细胞DNA的辐射损伤，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:研究细胞自噬对辐射所致DNA损伤的修复作用及其作用机制方法:1、采用流式细胞术和激光共聚焦荧光显微镜技术检测小鼠全骨髓单个核细胞中带荧光标记γ-H2AX蛋白的表达情况。2、采用碱性或中性的单细胞彗星电泳实验检测细胞中DNA双链断裂情况。3、应用免疫印迹方法检测雷帕霉素(Rapamycin,Rap)处理后细胞中Stat3、自噬相关蛋白。4、应用荧光定量PCR检测慢病毒侵染后细胞中Stat3的m RNA水平。5、应用成像流式细胞术检测处理后细胞的p-Stat3(Y705)在细胞核中的定位情况。结果:1、雷帕霉素对骨髓血细胞DNA双链的断裂有辐射保护作用。无论在体内还是体外,雷帕霉素处理组的骨髓单个核细胞辐照后产生的γ-H2AX都比单独辐照组明显降低。单细胞碱性彗星电泳实验所检测雷帕霉素处理组的细胞的彗星尾距也明显地降低(为p0.05),而能表征DNA双链断裂(DSB)的中性彗星电泳实验检测发现,雷帕霉素处理辐照组比单独辐照组所产生的DSB减少(p0.05)。2、雷帕霉素通过激活自噬实现DNA双链断裂损伤的辐射保护作用。蛋白印迹检测发现,雷帕霉素预处理后单个核细胞的自噬水平升高。用Baf A1抑制自噬后,雷帕霉素介导的辐照保护作用明显被抑制。运用造血系统特异性敲除Atg7的小鼠模型研究发现,在自噬缺失时,雷帕霉素介导的DSB损伤修复的作用受到抑制。3、在对骨髓单个核细胞的辐照保护作用中,Stat3的活性受到自噬调控。雷帕霉素预处理可以激活Stat3通路,抑制自噬或自噬缺陷都能明显抑制Stat3的激活。4、自噬对骨髓血细胞DNA的辐射保护作用依赖于Stat3。通过药物抑制Stat3的活化或用sh RNA干扰Stat3的表达,发现Stat3活性受到抑制时,自噬介导的辐照保护作用受到削弱。结论:雷帕霉素预处理能降低辐照导致的骨髓细胞DNA双链断裂的DNA损伤,这种作用是通过自噬所介导的,自噬通过调控Stat3信号通路的活化参与DNA双链断裂的修复。
【关键词】：雷帕霉素 自噬 DNA双链断裂损伤 Stat3 辐照
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R818
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-11
• 材料与方法11-18
• 一、材料11-13
• 1、小鼠11
• 2、细胞11
• 3、主要试剂11-12
• 4、主要仪器12-13
• 二、方法13-18
• 1、细胞培养13
• 2、流式细胞术13
• 3、免疫荧光染色13-14
• 4、单细胞彗星电泳实验14
• 5、蛋白质免疫印迹14-15
• 6、实时定量PCR15-17
• 7、慢病毒的包装和侵染17-18
• 实验结果18-27
• 一、雷帕霉素对骨髓血细胞DNA双链的断裂有辐射保护作用18-20
• 二、雷帕霉素通过激活自噬实现DNA双链断裂损伤的辐射保护作用20-22
• 三、STAT3 在自噬介导的辐照保护中受自噬调控22-24
• 四、自噬对骨髓血细胞DNA的辐射保护作用依赖于STAT324-27
• 讨论27-29
• 参考文献29-31
• 综述31-44
• 一、细胞自噬在细胞中作用31-32
• 二、细胞自噬在基因组稳定性的作用32-33
• 三、细胞自噬在DNA损伤修复中的角色33-34
• 四、自噬在辐射保护中的研究进展34-35
• 五、STAT3 与细胞自噬的关系35-36
• 六、STAT3 与DNA损伤修复的研究进展36-37
• 参考文献37-44
• 附录44-45
• 中英文缩略词汇表45-47
• 致谢47-48

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  本文关键词：自噬通过Stat3信号通路降低骨髓血细胞DNA的辐射损伤，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：326671