卵巢癌SPOP促凋亡作用及其机制的初步探讨

发布时间：2017-10-18 02:25

  本文关键词：卵巢癌SPOP促凋亡作用及其机制的初步探讨

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【摘要】：目的:通过检测卵巢癌中SPOP(Speckle-type POZ protein)基因状态(缺失),分析SPOP基因与卵巢癌的临床分型、组织病理分级的相关性;对SPOP基因在卵巢癌中可能扮演角色及其在卵巢癌发生发展过程中可能的机制进行初步探讨。方法:1、利用荧光原位杂交(FISH)技术检测SPOP基因在卵巢癌中的状态,分析SPOP基因与卵巢癌的临床分型、组织病理分级的相关性。2、免疫组织化学(IHC)检测SPOP在卵巢癌组织中的表达。3、Western Blotting检测人卵巢癌细胞株SKOV3,OVCAR-3中SPOP蛋白表达水平。4、构建干扰SPOP的SKOV3细胞模型,运用RT-PCR和Western Blotting鉴定干扰效率。5、利用流式细胞术检测细胞周期、凋亡。6、蛋白质质谱、生物信息学分析寻找与SPOP相互作用的潜在底物蛋白,初步探讨卵巢癌可能的发病机制。结果:1、卵巢癌组织和正常卵巢组织的SPOP基因状态(缺失)有明显差异(P0.01,P=0)。2、88例(90例中2例FISH信号不可识别)卵巢癌组织中有46例存在SPOP基因缺失(52.27%,46/88),而10例正常卵巢组织中未发现SPOP基因缺失(0%,0/10)。3、卵巢癌组织中频繁出现17号染色体单体(51.14%,45/88),但正常卵巢组织中未发现17号染色体单体(0%,0/10)。4、浆液性上皮性卵巢癌高比例出现SPOP基因缺失(67.21%,41/61),分级为3级的浆液性上皮性卵巢癌SPOP基因缺失率最高(83.78%,31/37)。5、88例(90例中2例组织脱片)卵巢癌组织中高比例出现SPOP蛋白表达(45.45%,40/88),10例正常卵巢组织中SPOP蛋白无表达(0%,0/10)。6、卵巢癌组织中IHC和FISH结果一致性较差(Kappa=0.036,P=0.501)。7、干扰组与空载组相比凋亡减少。8、质谱共鉴定出差异蛋白4347个,其中差异显著的蛋白(符合以下条件:P值0.05;肽段3个;ratio1.5为上调或ratio0.67为下调)共计110个,蛋白上调16个,蛋白下调94个。9、对110个差异显著的蛋白进行了生物信息学分析,发现DUSP10可能为SPOP的直接底物,Bcl2l13蛋白及Bak1蛋白可能为SPOP调控通路的下游关键节点因子。结论:SPOP基因在卵巢癌中高频缺失,尤其在浆液性3级的卵巢癌中缺失率达83.78%;SPOP可能通过促进细胞凋亡而发挥抑癌作用。
【关键词】：卵巢癌 SPOP 基因缺失 细胞凋亡 蛋白质质谱技术
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-13
• 第一部分 卵巢癌SPOP基因状态研究13-26
• 1 材料13-14
• 2 方法14-17
• 3 结果17-23
• 4 讨论23-26
• 第二部分 卵巢癌SPOP促凋亡作用及其初步的机制探讨26-53
• 1 材料26-29
• 2 方法29-40
• 3 结果40-49
• 4 讨论49-53
• 全文总结53-54
• 参考文献54-57
• 文献综述57-64
• 参考文献61-64
• 致谢64-65
• 攻读硕士期间发表的学术论文65

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本文编号：1052413