复合脂肪干细胞的微米纱补片的实验研究

发布时间：2017-11-11 13:38

  本文关键词：复合脂肪干细胞的微米纱补片的实验研究

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【摘要】：研究目的:比较静电动态液体纺纱法制备的大孔径、高孔隙率的TPU/P(LLA-CL)微米纱支架和传统静电纺丝制备的TPU/P(LLA-CL)纳米纤维支架的表征,包括两种支架的表面形貌、力学性能等;研究两种支架材料与兔脂肪干细胞构建女性盆底组织工程网片的生物相容性。研究方法:1、TPU/P(LLA-CL)微米纱和纳米纤维支架的制备和表征测试:将TPU/P(LLA-CL)按照质量比例为100/0,75/25,50/50,25/75,0/100溶解于六氟异丙醇,分别采用静电动态液体纺纱技术制备复合微米纱支架、传统静电纺丝技术制备复合纳米纤维支架;应用扫描电子显微镜观察两种支架的形貌,计算两种支架材料的纤维直径、孔隙率和孔径的大小;应用万能材料测试机检测两种支架的力学性能;应用傅里叶红外光谱分析不同比例的支架材料的表面化学性能。2、TPU/P(LLA-CL)微米纱和纳米纤维支架复合兔脂肪干细胞构建盆底组织工程补片:分离兔脂肪干细胞,慢病毒介导转染EGFP对细胞进行标记;将每种支架制备成0.5cm×0.5cm大小的样本,共分为微米纱、纳米纤维和对照组三组(n=3);将兔脂肪干细胞接种在三组的样本上,通过扫描电子显微镜、倒置荧光显微镜、CCK-8实验法等方法检测兔脂肪干细胞在两种支架表面的黏附、生长和增殖情况;组织学切片HE染色分析细胞长入支架的情况。研究结果:1、微米纱粗细不均,表面粗糙,纳米纤维支架的纤维粗细均匀,表面光滑;微米纱的平均直径约为14.05±2.21μm,纳米纤维的平均直径约为1.132±0.18μm,差异具有统计学意义(P(27)0.05);微米纱支架的平均孔径(550.78±142.60μm2)明显大于纳米纤维支架(69.05±19.18μm2),差异具有统计学意义(P(27)0.05);微米纱支架孔隙率(79.09±3.22%)明显高于纳米纤维支架(61.8±1.64%),差异具有统计学意义(P(27)0.05)。同一种质量比例的TPU/P(LLA-CL)微米纱和纳米纤维支架力学性能差异无统计学意义(P(29)0.05)。微米纱支架,TPU/P(LLA-CL)为50/50时断裂应力最大(11.5±3.43Mpa),与天然阴道壁组织力学性能最接近。五种不同比例的纳米纤维支架,随着TPU比例的增加,断裂应力随之增大。微米纱支架和纳米纤维支架表面TPU和P(LLA-CL)没有发生化学反应。2、CCK-8试验显示接种细胞1d后,三组之间吸光度值无明显差异,差异无统计学意义(P=0.806);接种细胞后4d,微米纱支架上的吸光度值大于纳米纤维支架和空白板的吸光度值,但差异无统计学意义(p=0.083),随着培养细胞时间的延长,三组在接种细胞7d后的吸光度值均高于其1d和4d的吸光度值;在接种细胞7d时,纳米纤维支架组与对照组之间吸光度值差异具有统计学意义(p0.05),微米纱支架与纳米纤维支架之间,微米纱支架与对照组之间的差异性均具有统计学意义(p0.05)。根据HE染色结果分析得到细胞接种1d、4d和7d后,ADSCs长入纳米纤维支架的平均深度分别为(36.50±3.08μm、37.06±2.23μm和40.17±4.96μm),第1d和4d(P=0.06)、4d和7d(P=0.06)、1d和7d(P=0.22)之间差异无统计学意义。ADSCs长入微米纱支架的平均深度分别为250.00±33.62μm,350.90±38.92μm和449.01±51.73μm,第1d和4d(P(27)0.05)、4d和7d(P(27)0.05)、1d和7d(P(27)0.05)之间差异均具有统计学意义。结论:TPU/P(LLA-CL)微米纱是一种大孔径、高孔隙率的三维支架结构;与TPU/P(LLA-CL)纳米纤维支架相比,更能促进细胞粘附和增殖,其力学性能与天然阴道壁组织接近,并能有效改善细胞难以长入的情况,能更好的模拟天然细胞外基质,是一种极具潜力的盆底组织工程支架。
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R318.08;R713

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