宫内膜干细胞在体外对U87细胞的趋化性研究

发布时间：2017-11-19 00:05

  本文关键词：宫内膜干细胞在体外对U87细胞的趋化性研究

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【摘要】：本研究目的为探究MenSC(宫内膜干细胞,Menstrual blood stem cell)在体外对肿瘤细胞U87的趋化性及其内在作用机制。首先,我们通过体外实验探究SDF-1α因子能否促进MenSC对U87细胞的趋化性,结果发现随着加入SDF-1α因子浓度的升高,MenSC的趋化能力对应增强。并且我们通过敲低SDF-1α因子的受体CXCR4与CXCR7的表达,发现沉默表达后的MenSC对U87细胞的趋化性明显下降。由此可知,SDF-1α/CXCR4信号轴在MenSC对U87细胞的趋化过程中起着重要的作用。接着,我们在MenSC中加入100ng/ml的SDF-1α因子进行刺激,分别对加入后不同时间点0min、1min、5min、15min、30min、60min的相关蛋白表达水平进行测定,结果发现p-Jak2和p-STAT3表达水平在加入SDF-1α因子后立即上升,并在5min表达水平达到最高,之后下降保持不变；P-ERK1/2表达水平在加入SDF-1α因子后逐渐升高,在30min表达水平达到最高,之后保持不变；P-AKT表达水平在加入S DF-1α因子后立即上升,并在5min表达水平达到最高,之后下降保持不变。并且我们用抑制剂阻断Jak2/STAT3信号通路ERK信号通路,来观察阻断后是否影响MenSC对U87细胞的迁移能力。结果发现阻断Jak2/STAT3信号通路极显著的抑制了MenSC对U87细胞的迁移能力；阻断ERK信号通路也在一定程度上抑制了MenSC对U87细胞的迁移能力。由此结果可以表明Jak2/STAT3和ERK信号通路在MenSC对U87的趋化性过程中起着重要的作用。最后,我们通过在MenSC中加入100ng/ml的S DF-1α因子进行刺激,分别对加入后不同时间点0min、1min、5min、15min、30min、60min的相关骨架蛋白表达水平进行测定和细胞骨架荧光检测,发现p-FAK蛋白表达水平在加入SDF-1α因子后立即上升,并持续保持不变,p-Paxillin表达水平在加入SDF-1α因子后持续上升,并在15min达到最大水平,之后保持不变；细胞骨架在加入SDF-1α因子后伸展得到增强,并在15min达到最大水平,之后保持不变。相反的,我们在MenSC中加入Jak2/STAT3和ERK抑制剂,来检测相关骨架蛋白表达水平和进行细胞骨架的荧光检测,结果发现Jak2/STAT3和ERK抑制剂都能够抑制p-FAK和p-Paxillin的表达水平,并且能够抑制MenSC骨架的伸展。综上,我们研究证实了SDF-1α结合其受体CXCR4/7进而激活Jak2/STAT3和ERK1/2信号通路,反过来调节FAKs引起肌动蛋白细胞骨架的重塑,从而促进MenSC的迁移。基于以上,我们认为SDF-1α/CXCR4、Jak2/STAT3 和 ERK信号通路在MenSC对U87的趋化性过程中起着重要的作用。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R711

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本文编号：1201605