热休克因子HSF1介导卵巢间质细胞活化为癌相关成纤维细胞（CAFs）促进肿瘤细胞转移的功能研究

发布时间：2017-12-10 19:05

  本文关键词：热休克因子HSF1介导卵巢间质细胞活化为癌相关成纤维细胞（CAFs）促进肿瘤细胞转移的功能研究

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【摘要】：背景与目的:卵巢癌的二元模式分类逐渐被接受,I型卵巢癌以低级别浆液性癌和子宫内膜样癌为代表,表现为膨胀性生长和低侵袭潜能,II型卵巢癌以高级别浆液性癌和子宫内膜样癌为代表,表现为弥漫性生长和高侵袭潜能。微环境在肿瘤研究中的作用逐渐受到重视,CAFs是肿瘤微环境中的主要成分。前期实验成功分离出I型CAFs和II型CAFs,且实验结果提示两类CAFs对肿瘤细胞浸润转移促进作用的不同与其来源的卵巢癌细胞本身的特质有关,但机制尚不清楚。HSF1是一种热休克因子,能够编程肿瘤间质细胞从而促进恶性肿瘤形成。本文探讨卵巢癌细胞中HSF1活化对间质细胞中HSF1表达的影响及其在促卵巢癌侵袭转移潜能中的作用。方法:1.从Ⅰ/Ⅱ卵巢癌新鲜标本中分离提纯Ⅰ/Ⅱ型CAFs及相应的Ⅰ/Ⅱ型肿瘤细胞,并验证CAFs对相应原代卵巢癌细胞迁移的促进作用。2.构建不同侵袭潜能卵巢癌细胞株的小鼠异种移植瘤,验证对NFs的活化募集及促进肿瘤转移的作用。3.免疫组化检测HSF1在10例正常卵巢组织、Ⅰ/Ⅱ型各20例卵巢癌组织中的表达情况,免疫细胞化学验证NFs与CAFs中HSF1表达情况;4.Western blot检测卵巢癌细胞株及原代分离提纯的NFs和CAFs中HSF1表达;5.收集上皮性卵巢癌细胞株的条件培养基与NFs共培养得到inducible CAFs(indcafs),检测nfs/indcafs/cafs中hsf1及α-sma的蛋白和mran表达,同时验证三种细胞本身及对hey细胞转移能力影响;6.rna干扰cafs中hsf1表达后,采用westernblot检测三组细胞(caf-nt/caf-ihsf1/nfs)中hsf1及α-sma表达;7.收集caf-nt/caf-ihsf1条件培养基,比较caf-nt/caf-ihsf1本身运动能力及其条件培养基(cm)对hey细胞株迁移侵袭能力的影响。结果:1.Ⅱ型cafs对其本身分离出的原代肿瘤细胞迁移能力的促进作用强于Ⅰ型cafs对其本身分离出的原代肿瘤细胞的迁移促进作用;2.体内试验验证Ⅱ型卵巢癌细胞株对小鼠体内nfs募集活化作用增强,且其活化后的cafs对卵巢癌细胞株迁移促进作用同样增强;3.免疫组化结果显示上皮性卵巢癌组织的癌细胞与间质细胞中hsf1呈高表达,正常卵巢组织上皮细胞与间质中hsf1几乎不表达(p0.01);免疫细胞化学验证hsf1在cafs中表达高于nfs。4.Ⅱ型卵巢癌细胞株中hsf1表达高于Ⅰ型卵巢癌细胞株,cafs细胞中hsf1表达高于nfs;5.indcafs中hsf1及α-sma表达增高,其本身迁移能力增加,对癌细胞的转移促进作用明显增高(p0.01)。6.与对照组(caf-nt)相比,rna干扰cafs中hsf1(caf-ihsf1)后,hsf1与α-sma蛋白表达水平下降,transwell结果显示其本身迁移侵袭能力显著下降(p0.01),其条件培养基与hey细胞共培养明显降低hey细胞迁移侵袭能力(p0.05)。结论:hsf1在卵巢癌组织中表达高于正常卵巢组织,间质细胞表达与癌细胞表达强度一致,恶性程度越高表达强度越强,提示hsf1与卵巢癌恶性潜能可能相关;体内进一步验证卵巢癌细胞株对正常间质的募集活化进而促进癌细胞转移的作用。癌细胞与NFs共培养可能诱导NFs中HSF1及α-SMA表达,促进其本身的迁移能力,同时诱导其对癌细胞迁移侵袭潜能的促进作用。干扰CAFs中HSF1下调其本身及对卵巢癌细胞的迁移侵袭能力,说明卵巢癌细胞可能通过HSF1活化正常间质细胞,从而促进恶性肿瘤进展。以上结果均验证HSF1可能介导卵巢癌间质成纤维细胞激活进而促进卵巢肿瘤的恶性进展。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.31

【参考文献】

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1 Yu Yan;Li-Feng Wang;Rui-Fen Wang;;Role of cancer-associated fibroblasts in invasion and metastasis of gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2015年33期

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本文编号：1275533