TLR4通过NF-κB信号途径对宫颈癌细胞增殖的影响
本文关键词: 宫颈癌 Toll样受体 小干扰RNA NF-κB信号通路 细胞增殖 出处:《中国病理生理杂志》2015年02期 论文类型:期刊论文
【摘要】:目的:研究Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)小干扰RNA(siRNA)是否通过NF-κB信号途径下调Bcl-2而抑制宫颈癌细胞的增殖。方法:设计并合成针对TLR4基因的3条特异性siRNA)及阴性siRNA,并同时设立空白对照,然后用脂质体LipofectamineTM2000转染细胞。通过半定量RT-PCR和Western印迹法分别检测转染前后He La细胞中TLR4 mRNA和蛋白表达水平,Western印迹法检测p65及Bcl-2蛋白表达水平,MTT法和平板克隆检测细胞增殖率,Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期。结果:3条针对TLR4基因的siRNA均能抑制TLR4的mRNA和蛋白表达,其中TLR4-siRNA-003的沉默效率最高。转染TLR4-siRNA-003 48 h后细胞中TLR4的mRNA和蛋白表达水平分别下调62%和89%,p65及Bcl-2蛋白水平明显下调,同时细胞增殖明显受到抑制,细胞凋亡率显著升高,细胞周期被阻滞于G1期。结论:TLR4特异性siRNA能够有效沉默TLR4基因表达,并通过NF-κB信号通路下调Bcl-2而显著抑制宫颈癌He La细胞的增殖。TLR4可能成为治疗宫颈癌的一个新靶点。
[Abstract]:Objective: to study Toll like receptor 4 Toll-like receptor 4. TLR4). Whether down-regulation of Bcl-2 through NF- 魏 B signaling pathway inhibits the proliferation of cervical cancer cells. Methods: three specific siRNAs targeting TLR4 gene and negative siRNA were designed and synthesized. At the same time, blank control was established. Then the cells were transfected with liposome LipofectamineTM2000. He was detected by semi-quantitative RT-PCR and Western blot before and after transfection. The expression level of TLR4 mRNA and protein in La cells. The expression of p65 and Bcl-2 protein was detected by Western blot. Apoptosis was detected by flow cytometry with Annexin V-FITC / Pi staining. Results all three siRNA targeting TLR4 gene could inhibit the expression of mRNA and protein of TLR4. The silencing efficiency of TLR4-siRNA-003 was the highest. Transfection of TLR4-siRNA-003 48. The expression of TLR4 mRNA and protein were down-regulated by 62% and 89%, respectively. The levels of p65 and Bcl-2 protein were down-regulated, while the proliferation of cells was inhibited, and the apoptosis rate was significantly increased. Cell cycle was blocked in G1 phase. Conclusion siRNA specific to TLR4 can effectively silence the expression of TLR4 gene. And down-regulation of Bcl-2 through NF- 魏 B signaling pathway could significantly inhibit the proliferation of He-La cells. TLR4 may become a new target for the treatment of cervical cancer.
【作者单位】: 南昌大学第二附属医院肿瘤科;南昌大学第二附属医院消化内科;
【分类号】:R737.33
【正文快照】: 宫颈癌是严重危害女性健康的恶性肿瘤,我国宫颈癌的发生率位居世界第一,占世界每年新增病例的28.8%,居女性生殖道恶性肿瘤第1位[1]。宫颈癌由于对大多数抗癌药物不敏感,所以首选治疗为手术及放射治疗,但是晚期或复发转移患者效果欠佳,化疗具有全身作用特点,所以寻求新的靶位基
【参考文献】
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,本文编号:1451603
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