紫杉醇纳米药物联合放疗对宫颈癌协同治疗作用的研究

发布时间：2018-01-25 12:57

  本文关键词： 紫杉醇 纳米药物 放疗 联合作用 宫颈癌　出处：《西南医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:研究紫杉醇纳米药物联合放疗对宫颈癌的抑制作用,并探索其相关机制。方法:首先,使用固体沉淀法完成不同理论载药率的紫杉醇纳米药物(PTX-NPs)的制备,并通过高效液相色谱仪(HPLC)对其实际载药率(DL)、包封率(EE)及体外释放速率进行测量,使用动态光散射仪(DLS)对粒径及纳米药物稳定性进行评估,在使用透射电镜仪(TEM)观察紫杉醇纳米药物的形貌,在体外通过宫颈癌Hela细胞,使用四氮唑化合物(MTT法)测量了紫杉醇纳米药物和Taxol?小的细胞毒性。在对负Hela宫颈癌的裸鼠进行体内实验中,将瘤体积生长到约200mm3左右的裸鼠随机分为6组:NS组(对照组)、PTX组、PTX-NPs组、RT组、PTX+RT组和PTX-NPs+RT组(n=12),并分别予以NS、PTX 2.5mg/kg或放疗15Gy/5F处理。治疗结束后24小时,在NS组、PTX+RT组和PTX-NPs+RT组中分别随机选取3只裸鼠,对其进行18F-脱氧葡萄糖正电子发射计算机断层现象(18F-FDG PET/CT)扫描显像,评估其宫颈癌肿瘤早期代谢情况,然后随机处死每组一半的裸鼠,并立即剥取处死裸鼠的瘤组织,以行宫颈癌肿瘤细胞增殖(Ki-67)、肿瘤微血管密度(MVD)(CD31)和血管内皮生长因子(VEGF)相关指标的免疫组化,并观察所有剩余裸鼠肿瘤的体积生长变化及各组裸鼠生存情况。结果:实验中所制备的不同理论载药率的紫杉醇纳米药物中,8%的PTX-NPs与6%或10%的理论载药率的PTX-NPs相比较,有更好的实际载药率(7.96±0.06%)及包封率(99.78±0.34%),在TEM成像观察时发现,紫杉醇纳米药物在水溶液的中均成球形状态,且分散均匀,这也证实了其在DLS中所测得的粒径大小(45.71±0.32nm)及粒径多分散指数(PDI)(0.19±0.02)。除此之外,紫杉醇纳米药物在实验温度为4℃或25℃的环境条件中,且没有使用任何溶液稳定剂的情况下,能在PBS或含10%胎牛血清的PBS中稳定保持其粒径大小及多分散指数至48小时。在紫杉醇纳米药物的体外释放实验中,与游离紫杉醇相比,PTX-NPs表现为缓慢释放模式,且没有观察到明显的突释现象,在第14天时,紫杉醇纳米药物累积释放紫杉醇63.84%。在体外细胞毒性实验中,当PTX-NPs在紫杉醇浓度大于4μg/m L时,其对Hela细胞的毒性比Taxol?小(P0.05),而当紫杉醇浓度小于4μg/m L时,紫杉醇纳米药物和Taxol?两者的细胞毒性差异没有统计学意义(P0.05)。在体内试验中,在第22天时,PTX-NPs+RT组瘤体积(623.5mm3)与PTX+RT组(1121.4mm3,P0.01)、RT组(1176.9mm3,P0.01)、PTX-NPs组(2074.1mm3,P0.01)、PTX组(2197.2mm3,P0.01)以及NS组(2347.2mm3,P0.01)相比较,能明显抑制宫颈癌肿瘤的体积生长,且PTX-NPs+RT组裸鼠的中位生存期为87天,明显长于PTX+RT组的61天,P0.01)、RT组(64天,P0.01)、PTX-NPs组(31天,P0.01)、PTX组(34天,P0.01)以及NS组(25天,P0.01),PET/CT显像观察到PTX-NPs+RT组裸鼠肿瘤的T/M值(1.182±0.043)与PTX+RT组(2.032±0.214)、NS组(2.635±0.074)相比,肿瘤组织的代谢更低(P0.05)。在行宫颈癌瘤组织免疫组化探索相关机制的试验中观察到,PTX-NPs+RT组的Ki-67阳性细胞表达数(21.7±7.5%)明显低于PTX+RT组(40.6±4.4%,P0.05)、RT组(57.2±5.0%,P0.05)、NPs组(73.2±5.8%,P0.05)、PTX组(79.6±6.2%,P0.05)以及NS组(87.2±4.0%,P0.05),且具有统计学意义;肿瘤组织中CD31阳性的微血管密度(MVD)(2.1±0.3%)明显少于PTX+RT组(3.8±0.4%,P0.05)、RT组(4.2±0.8%,P0.05)、NPs组(8.7±0.7%,P0.05)、PTX组(9.0±0.4%,P0.05)以及NS组(9.8±0.7%,P0.05),且具有统计学意义;并且,PTX-NPs+RT组VEGF阳性率(30.7±4.0%)也明显低于PTX+RT组(85.6±3.5%,P0.01),RT组(89.7±3.5%,P0.01),NPs组(75.7±3.2%,P0.01),PTX组(77.4±5.1%,P0.01)以及NS组(80.0±5.0%,P0.01),且具有统计学意义。结论:1、实验中我们所制备的理论载药率为8%的紫杉醇纳米药物具有良好的包封率、载药率及稳定性,在水溶液中成单一分散的球形状态,其在体外呈缓慢释放模式,体外细胞毒性更小。2、实验中所使用的PTX-NPs剂量小,其联合放疗能有效抑制宫颈癌肿瘤大小的生长并延长裸鼠的中位生存期,PET/CT扫描显像结果表明PTX-NPs联合放疗能有效降低肿瘤组织的早期代谢情况。3、低剂量的PTX-NPs联合放疗能有效抑制宫颈癌生长的机制与抑制宫颈癌肿瘤细胞的增殖及血管生成相关。
[Abstract]:Objective : To study the inhibitory effect of paclitaxel nano - drug combined with radiotherapy on cervical cancer , and to explore its mechanism . Methods : In vivo experiments were carried out by using solid - state precipitation method to measure the drug - carrying rate ( DL ) , entrapment efficiency ( EE ) and release rate of paclitaxel . In vivo experiments were carried out to observe the changes of tumor cell proliferation ( Ki - 67 ) , microvessel density ( MVD ) ( MVD ) ( MVD ) ( MVD ) ( MVD ) ( MVD ) ( MVD ) and the rate of survival in nude mice . 鍦ㄧ��14澶╂椂,绱�鏉夐唶绾崇背鑽�鐗╃疮绉�閲婃斁绱�鏉夐唶63.84%.鍦ㄤ綋澶栫粏鑳炴瘨鎬у疄楠屼腑,褰揚TX-NPs鍦ㄧ传鏉夐唶娴撳害澶т簬4渭g/m L鏃，

本文编号：1462899