塞来昔布对卵巢癌SKOV3细胞顺铂化疗的增敏作用及分子机制研究

发布时间：2018-03-03 17:21

  本文选题：卵巢癌　切入点：塞来昔布　出处：《天津医科大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的： 通过体外实验观察非甾体抗炎药塞来昔布对卵巢癌SKOV3细胞顺铂化疗的增敏作用,并探讨可能的分子机制。 方法： 1、MTT法检测不同浓度塞来昔布对SKOV3细胞的生长抑制作用,并筛选出无毒剂量浓度,作为后续实验浓度。 2、MTT法检测顺铂联合无毒剂量塞来昔布对SKOV3的细胞毒性。 3、流式细胞术(FCM)检测顺铂联合无毒剂量塞来昔布对SKOV3细胞凋亡率的影响。 4、Real-Time PCR、Western Blot检测顺铂与无毒剂量塞来昔布联合用药后SKOV3细胞中Survivin mRNA及蛋白的表达变化。 5、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测顺铂与无毒剂量塞来昔布联合用药后SKOV3细胞培养基中前列腺素E2的含量。 结果： 1、MTT结果显示：COX-2特异性抑制剂塞来昔布对卵巢癌SKOV3细胞具有生长抑制作用,且呈时间-剂量依赖性。当塞来昔布浓度≤10uM/L时,对SKOV3细胞生长无显著抑制作用(抑制率10%),因此筛选10uM作为后续实验浓度。 2、MTT结果显示：10uM塞来昔布与顺铂联合应用显著抑制SKOV3细胞的生长,生长抑制率明显高于单用塞来昔布组和顺铂组,差异有统计学意义(P=0.000),且呈时间依赖性(F=204.287,P=0.000),根据金正钧法计算两药联合作用24、48和72h后的合并效应q值,分别为1.27、1.37、1.38,均1.15,表现为增敏作用。 3、流式细胞术结果：10uM塞来昔布与顺铂联合作用SKOV348h后细胞凋亡率达46.98%,高于单用DDP组的27.99%。 4、Real-Time PCR及Weatern Blot检测结果表明：l0uM塞来昔布与顺铂联合作用SKOV348h后,细胞中Survivin mRNA及蛋白相对表达量均明显低于单用顺铂组,差异有统计学意义(P=0.000)。 5、ELISA法检测结果显示：10uM塞来昔布与顺铂联合作用SKOV3细胞48h后,培养基中人PGE2含量与单用塞来昔布组比较没有明显差异(P0.05)。 结论： 1、非甾体抗炎药塞来昔布对卵巢癌SKOV3细胞具有生长抑制作用,且呈时间-剂量依赖性； 2、塞来昔布可增加卵巢癌SKOV3细胞对顺铂化疗的敏感性,呈时间依赖性； 3、塞来昔布对卵巢癌SKOV3细胞顺铂化疗的增敏作用可能与下调了Survivin基因及蛋白表达水平,促进细胞凋亡有关； 4、塞来昔布在SKOV3细胞顺铂化疗增敏作用中可能仅起到了调节作用,并没有发挥治疗作用,是COX-2非依赖的。
[Abstract]:Objective:. The sensitizing effect of celecoxib, a non-steroidal anti-inflammatory drug, on cisplatin chemotherapy in ovarian cancer SKOV3 cells was studied in vitro and the possible molecular mechanism was discussed. Methods:. 1the inhibitory effect of celecoxib on the growth of SKOV3 cells was detected by MTT assay, and the nontoxic concentration was selected as the subsequent concentration. The cytotoxicity of cisplatin combined with nontoxic dose celecoxib on SKOV3 was detected by MTT assay. 3. The effect of cisplatin combined with nontoxic dose celecoxib on apoptosis of SKOV3 cells was detected by flow cytometry. 4. The expression of Survivin mRNA and protein in SKOV3 cells was detected by Western Blot after the combination of cisplatin and nontoxic celecoxib. 5. The level of prostaglandin E _ 2 in SKOV3 cell culture medium was determined by Elisa. Results:. 1MTT results showed that celecoxib, a specific inhibitor of cyclooxygenase-2, inhibited the growth of ovarian cancer SKOV3 cells in a time-dose dependent manner. When the concentration of celecoxib was 鈮，

本文编号：1561965