miR-145在宫颈癌放疗敏感性调节中的作用及机制研究

发布时间：2018-03-20 09:58

  本文选题：宫颈癌　切入点：miR-145　出处：《第二军医大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：研究背景及目的： 宫颈癌是世界范围内女性最常见的恶性肿瘤之一，发病率仅次于乳腺癌。据统计，我国每年的新增发病人数就高达约13万，且患病女性年龄呈年轻化的趋势。现已明确，高危型人乳头瘤病毒持续感染是宫颈癌发生的主要病因。在治疗方面，根治性子宫切除术及辅助性放化疗的不断完善，使早期宫颈癌患者的5年生存率提高到90%左右，但是对于晚期宫颈癌患者的治疗效果仍不容乐观。放射治疗是局部晚期宫颈癌最主要的治疗方式之一，但肿瘤辐射抵抗效应的产生，进而诱发肿瘤复发、转移等，严重影响了放疗效果。 微小RNA（microRNAs，miRNAs）是一类长度约为20-22个核苷酸的短小非编码RNA。近年来，研究发现，miRNAs的异常表达在肿瘤发生、发展中起着重要的作用，，影响着肿瘤细胞的增殖、凋亡、分化、转移等。此外miRNAs还与肿瘤的治疗反应密切相关，且越来越多的研究证实多个miRNAs可以调节肿瘤细胞的放疗敏感性。筛选能预测放疗敏感性的miRNAs，并研究其在放疗敏感性调节中的作用及机制，能更好地解释辐射抵抗效应产生的原因，进而有助于为癌症患者制定更加高效、低害的个体化的治疗方案，并为放疗增敏治疗提供一个新的思路，有着重要的临床意义。 以往研究证实，Hsa-miR-145-5p（miR-145）是重要的抑癌相关miRNA，在多种肿瘤中降调表达，同时也是放疗相关miRNAs中颇具研究价值的一个分子。miR-145的表达受p53的调控，而后者作为基因卫士，在细胞应激刺激时起着促进细胞周期阻滞、凋亡的抑癌作用。多个基于宫颈癌的芯片研究发现miR-145在宫颈癌组织中显著下调表达，而上调后可有效抑制癌细胞增殖、增加药物敏感性。且有研究发现，辐射致癌小鼠模型的胸腺肿瘤组织、辐射刺激后的前列腺癌细胞中，miR-145的表达都出现了明显的变化。然而，miR-145与宫颈癌临床病理因素的相关性，及是否能够参与宫颈癌的放疗敏感性调节，尚无相关研究报道。在本课题中，我们结合临床样本，进一步验证、分析miR-145的降调有何临床意义，并在细胞、动物层面过表达miR-145，研究其对宫颈癌细胞放疗敏感性的调节作用及机制。 材料与方法： 我们首先收集42例临床宫颈癌患者的宫颈癌组织及癌旁非肿瘤组织中，利用RNA抽提、反转录及实时定量PCR技术，检测组织中miR-145表达水平的变化。并分析miR-145表达水平与宫颈癌临床病理因素的相关性。随后，我们挑选了对放疗较为敏感的人宫颈表皮癌细胞Me180细胞株及倾向于放疗抵抗的人宫颈腺癌来源的HeLa细胞和人宫颈鳞癌来源的SiHa细胞，检测不同放疗敏感性的宫颈癌细胞株中miR-145的表达差异，以及辐射处理后的变化情况。我们又利用miRNA模拟物mimic在宫颈癌细胞中过表达miR-145，用Cell Counting Kit-8（CCK-8）试剂、酶标仪检测宫颈癌细胞辐射后细胞活性的变化情况。采用Annexin V-FITC联合碘化丙啶染色液（Propidium Iodide，PI）双标记流式细胞术检测宫颈癌细胞辐射处理后的凋亡情况。我们还构建了HeLa细胞株裸鼠移植瘤模型，行辐射治疗，并予瘤内注射miRNA长效激动剂agomir，在瘤内外源性过表达miR-145，在体外水平研究miR-145对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响。最后，我们利用生物信息学分析及芯片技术，筛选出miR-145与宫颈癌及放疗相关的靶基因，在组织样本中验证其与miR-145的相关性，并在过表达miR-145的细胞中行RT-qPCR和Western blot，检测其mRNA、蛋白水平变化，还对裸鼠移植瘤中行免疫组织化学检测，分析其表达水平的变化。 研究结果 miR-145在宫颈癌组织中显著低表达，且其降调水平与临床晚期、较大的肿瘤体积、中低分化程度密切相关。miR-145在放疗敏感细胞Me180中表达水平高于放疗抵抗细胞HeLa、SiHa，且放疗抵抗细胞在放疗后，miR-145的水平也相应上调。过表达miR-145，可增加放疗后宫颈癌细胞的凋亡水平，降低细胞存活率。瘤内注射miR-145agomir，抑制肿瘤的生长速度，增强放疗敏感性。经生物信息学及芯片分析，我们挑选出与宫颈癌及放疗敏感性相关的靶基因HLTF。在细胞和组织水平，实验结果示miR-145可抑制HLTF的表达。 研究结论 ①miR-145在宫颈癌中下调表达，且与临床晚期、较大的肿瘤体积、中低分化程度密切相关。 ②miR-145可通过促进细胞凋亡、降低细胞存活率来正向调节宫颈癌的放疗敏感性。 ③miR-145可抑制HLTF的表达，miR-145可能通过降调HLTF来发挥降低宫颈癌细胞放疗抵抗性的作用。
[Abstract]:Research background and purpose:
Cervical cancer is one of the most common malignant tumor in women in the world, after the incidence of breast cancer. According to statistics, the number of new onset in our country every year is up to about 130 thousand, and the prevalence of female age was younger. It is now clear that HPV infection is a major cause for cervical cancer. In treatment, radical hysterectomy and adjuvant chemotherapy continues to improve, the early cervical cancer patients with 5 year survival rate increased to about 90%, but for the patients with advanced cervical cancer treatment effect is still not optimistic. Radiotherapy is one of the treatment of locally advanced cervical cancer primary tumor, but the radiation resistance effect, and thus induce tumor recurrence, metastasis, serious impact on the effect of radiotherapy.
Small RNA (microRNAs, miRNAs) is a short length of about 20-22 nucleotides encoding RNA. in recent years, the study found that the abnormal expression of miRNAs in tumorigenesis and development plays an important role in affecting tumor cell proliferation, apoptosis, differentiation and metastasis. In addition reaction of miRNAs and tumor therapy closely related, and more and more studies have confirmed that the radiosensitivity of multiple miRNAs can regulate tumor cells. Screening can predict the radiosensitivity of miRNAs, and study the radiation sensitivity in the regulation effect and mechanism, can better explain the effect of radiation resistance, and then contribute to cancer patients to make more efficient. Individualized treatment programs and low harm, and provides a new idea for radiosensitization treatment, have important clinical significance.
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本文编号：1638579