TBX2绕过卵巢癌细胞衰老发挥促增殖功能

发布时间：2018-04-16 06:44

  本文选题：TBX2 + 卵巢癌　； 参考：《天津医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:卵巢癌是目前致死率最高的妇科肿瘤,缺乏特异早期诊断手段和术后有效的药物是主要原因。TBX2定位于染色体17q23,比较基因组学分析发现卵巢癌在染色体17q23区域频繁发生突变,TBX2是候选致癌基因之一。TBX2属于T-box家族重要成员,广泛参与胚胎发育和癌症发生过程,是重要的转录调控因子。研究表明TBX2表达异常影响了包括乳腺癌、黑色素瘤等恶性肿瘤的细胞表型,本文计划通过检测不同卵巢组织中TBX2表达水平,观察TBX2在卵巢癌细胞中表达定位,分析TBX2差异性表达对卵巢癌细胞增殖、衰老的影响,初步探讨TBX2参与卵巢癌发生发展过程中可能的分子机制。方法:本课题分为三个部分开展研究。1.明确TBX2蛋白在卵巢癌细胞和组织中定位和表达水平:利用免疫荧光技术对卵巢癌中TBX2表达进行定位,并采用免疫组织化学染色分析卵巢组织中TBX2表达水平。2.构建TBX2恒定高表达和降表达卵巢癌SKOV3细胞株:构建过表达TBX2和TBX2表达沉默的重组慢病毒载体质粒,然后将上述质粒和空载体质粒分别包装成慢病毒颗粒,再将携带不同基因表达的慢病毒分别感染卵巢癌SKOV3细胞,加药筛选获得TBX2恒定高表达和降表达卵巢癌细胞株,最后采用实时荧光定量PCR(Real Time PCR)和免疫印迹(Western blot)技术检测各细胞株中TBX2 mRNA和蛋白表达水平。3.研究TBX2差异性表达对卵巢癌细胞增殖、衰老的影响,并初步分析相关分子机制:首先分别利用CCK8(cell counting kit-8)细胞计数法和克隆形成实验分析TBX2表达变化对人卵巢癌SKOV3细胞克隆形成能力和细胞增殖的影响。随后采用细胞衰老相关的β-半乳糖苷酶染色法(SA-β-Gal)分析TBX2表达变化对细胞衰老影响,再利用实时定量PCR(Real Time PCR)和免疫印迹(Western blot)技术检测细胞衰老相关分子标记物mRNA和蛋白表达变化。结果:1.TBX2在卵巢癌细胞高表达,以细胞核分布为主,细胞质中有少量表达。TBX2在卵巢癌组织中表达水平也明显高于良性卵巢囊肿组织。2.成功构建了过表达TBX2质粒和TBX2基因沉默的慢病毒载体质粒,通过慢病毒感染和药物筛选,获得稳定的TBX2过表达和TBX2基因沉默的卵巢癌SKOV3细胞株。3.TBX2基因沉默后卵巢癌SKOV3细胞增殖减慢和克隆形成能力降低,而过表达TBX2的SKOV3细胞表现出促进细胞增殖的能力,与对照组相比,均具有显著性差异(P0.05)。SA-β-Gal结果显示TBX2基因沉默引起衰老相关的β-半乳糖苷酶活性增强,β-半乳糖苷酶染色阳性率显著增加,具有统计学意义(P0.05),TBX2基因沉默诱导细胞衰老相关的分子标记物P21WAF1和P16INK4A表达上调。结论:1.TBX2主要分布在卵巢癌细胞核中,可能与TBX2主要在细胞核中发挥调控功能相适应。2.TBX2在卵巢癌组织中表达异常,提示TBX2可能参与卵巢恶性转变过程。3.TBX2差异性表达对卵巢癌细胞表型产生重要影响,TBX2在卵巢癌SKOV3细胞中发挥促进细胞增殖和抑制细胞衰老的功能,正向调控卵巢癌的发生发展。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.31

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本文编号：1757718