siRNA沉默HPV18-E7基因表达对人宫颈癌HeLa细胞凋亡和增殖的影响
本文选题:宫颈癌 + HPV-E基因 ; 参考:《病毒学报》2017年04期
【摘要】:研究小干扰RNA(siRNA)沉默18型人乳头瘤病毒(Human papillomavirus 18,HPV18)E7基因对人宫颈癌HeLa细胞凋亡和增殖的影响。培养人宫颈癌HeLa细胞株,构建靶向E7基因的两条siRNA,转染HeLa细胞株(实验组:分为siE7-1组和siE7-2组),以不做任何处理的HeLa细胞作为空白对照组(NC),转染无功能siRNA的HeLa细胞作为阴性对照组(Scramble,SCR)。转染48h后,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测转染E7siRNA后HeLa细胞mRNA含量变化;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测E7蛋白表达量变化;流式细胞术Flow cytometry(FCM)检测HeLa细胞凋亡情况;克隆形成和CCK-8检测HeLa细胞生长增殖情况。与NC组相比,siE7-1组和siE7-2组E7基因mRNA表达明显下调,差异有统计学意义(P0.01);转染48h后,与NC组相比,siE7-1和siE7-2实验组HeLa细胞内HPV18-E7蛋白表达水平明显下降(P0.05);转染48h后,siE7-1组和siE7-2组的细胞凋亡率分别为17.78%和36.44%,与NC组相比明显增多,差异有统计学意义(P0.01),细胞凋亡结果提示siRNA沉默E7促进HeLa细胞凋亡;CCK-8实验结果显示siE7-1组和siE7-2组细胞生长增殖抑制,差异有统计学意义(P0.01);克隆形成实验结果与CCK-8实验结果一致,siE7-1组和siE7-2组HeLa细胞形成的克隆数明显少于NC组,细胞生长增殖抑制(P0.01)。研究结果表明,沉默E7基因促进人宫颈癌HeLa细胞凋亡,抑制增殖,为宫颈癌治疗提供潜在靶点。
[Abstract]:To study the effect of small interference RNA-siRNA-silencing human papillomavirus type 18 (HPV18E7) gene on apoptosis and proliferation of human cervical cancer HeLa cells. Human cervical cancer HeLa cell line was cultured. Two siRNAs targeting E7 gene were constructed and transfected into HeLa cell lines (experimental group: divided into siE7-1 group and siE7-2 group. HeLa cells without any treatment were used as blank control group; HeLa cells transfected with non-functional siRNA as negative control group). After 48 hours of transfection, the changes of mRNA content in HeLa cells after transfection were detected by real-time fluorescence quantitative PCR RT-PCR, E7 protein expression was detected by Western blotting, apoptosis of HeLa cells was detected by flow cytometry (FCM). Clone formation and CCK-8 were used to detect the growth and proliferation of HeLa cells. Compared with NC group, the mRNA expression of E7 gene in siE7-1 group and siE7-2 group was significantly down-regulated (P 0.01). Compared with NC group and siE7-2 group, the expression of HPV18-E7 protein in HeLa cells decreased significantly, and the apoptotic rates of siE7-1 group and siE7-2 group were 17.78% and 36.44%, respectively, which were significantly higher than those in NC group. The result of apoptosis indicated that siRNA silencing E7 could promote apoptosis of HeLa cells. The results of CCK-8 experiment showed that siE7-1 group and siE7-2 group inhibited cell growth and proliferation. The results of Clone formation assay were consistent with those of CCK-8 assay, and the number of HeLa cells in siE7-1 group and siE7-2 group was significantly lower than that in NC group, and the cell growth and proliferation inhibition was P0.01%. The results showed that the silencing of E7 gene could promote apoptosis and inhibit proliferation of human cervical cancer HeLa cells and provide a potential target for cervical cancer therapy.
【作者单位】: 湖北省武汉市东湖医院;湖北省武汉市中心医院妇产科;
【基金】:武汉市卫生局临床医学科研项目资助(项目号:WX11B05),题目:多细胞球体模型分析缺氧诱导因子(HIF-1α)在宫颈癌发展演进进程中~~
【分类号】:R737.33
【相似文献】
相关期刊论文 前10条
1 王瑞廷,申兴斌,许倩,梅爱敏,郝希俊;黄芩茎叶总黄酮对人宫颈癌Hela细胞株体外生长的影响[J];山东医药;2005年02期
2 张清琴;寇小格;崔艳慧;杨军;;茶多酚对人宫颈癌Hela细胞系生长的影响[J];现代肿瘤医学;2010年11期
3 李华;韦立蓓;王育斌;;γδT细胞对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响[J];湖北科技学院学报(医学版);2013年01期
4 邱慧玲,陈惠祯,廖美焱,刘诗权,杨庆忆,候汉英;放射线诱导人宫颈癌耐药细胞凋亡的实验研究[J];肿瘤;2000年02期
5 王莹,李旭,陈葳;抗人宫颈癌单链抗体的基因构建、空间结构和进化分析[J];细胞与分子免疫学杂志;2005年06期
6 王莹;李旭;陈葳;;抗人宫颈癌单链抗体的表达、结构预测和功能分析[J];南方医科大学学报;2006年01期
7 刘雨声,牛巨伟,张卫华,孔为民,邓小虹;联合放疗热疗对人宫颈癌HeLa细胞作用的实验研究[J];首都医科大学学报;2005年05期
8 李诺飞;杜开春;;人宫颈癌基因的克隆及其真核表达载体的构建[J];中国实验诊断学;2007年12期
9 刘芸;刘爱华;吴向玲;江力玮;姚琦;邓鹏;姜勇;;人宫颈癌Hela细胞穿透肽的噬菌体展示技术筛选[J];微循环学杂志;2009年04期
10 黄光琦;Donald Blair;李茵;黄一峰;毛婷;宁其志;王艳萍;袁淑兰;;人宫颈癌癌基因的研究——转化活性及癌基因属性鉴定[J];遗传与疾病;1989年04期
相关会议论文 前10条
1 黎欣;徐碧泉;曹兰琴;;青年人宫颈癌的特点[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年
2 刘雨声;牛巨伟;张卫华;孔为民;邓小虹;;联合放疗热疗对人宫颈癌HeLa细胞作用的实验室研究[A];第三次全国妇产科基层医师学术会议资料汇编[C];2005年
3 熊艳;胡玉玲;魏晚霞;;老年人宫颈癌放疗的护理体会[A];全国第13届老年护理学术交流暨专题讲座会议、全国中医、中西医结合护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2010年
4 李小婷;傅士龙;申欣;江阿沛;周冬虎;孟徐连;韩素萍;冯晴;;人宫颈癌HeLa细胞中维甲酸作用于DNA拓扑异构酶Ⅱα的机制[A];第七届全国医学生物化学与分子生物学和第四届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术研讨会暨医学生化分会会员代表大会论文集[C];2011年
5 朱克修;李旭;陈葳;程小丽;;人宫颈癌细胞凋亡的研究[A];中国抗癌协会妇科肿瘤专业委员会第六次全国学术会议论文汇编[C];2001年
6 苏宝山;杨军;李牧;田玮;李宗芳;;苦参碱对人宫颈癌HeLa细胞凋亡机制的研究[A];中华医学会病理学分会2006年学术年会论文汇编[C];2006年
7 关燕清;屈晓丹;;人宫颈癌细胞凋亡的线粒体膜电位及细胞周期的研究[A];提高全民科学素质、建设创新型国家——2006中国科协年会论文集[C];2006年
8 笪宇蓉;姚智;邓为民;洪敬欣;何津岩;杨洁;;YD383,YD438对人宫颈癌细胞体外增殖及细胞周期的影响[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年
9 张蓓;刘嘉茵;韩素萍;候振;周静;;Genistein对人宫颈癌Hela细胞的增殖及凋亡的影响及其作为放疗增敏剂的初步探讨[A];江苏省抗癌协会妇科肿瘤专业委员会第四次肿瘤学术研讨会暨无锡市妇产科年会论文汇编[C];2005年
10 张贺玲;王惠兰;袁芳;杨素娟;;大蒜素油单独及与顺铂联合对人宫颈癌Hela细胞生长影响的研究[A];中国抗癌协会妇科肿瘤专业委员会第七次全国学术会议论文汇编[C];2003年
相关博士学位论文 前7条
1 陈秀玮;白桦脂酸诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡及机制的研究[D];黑龙江中医药大学;2012年
2 周菊梅;不同温度热疗对人宫颈癌细胞凋亡和增殖的影响[D];中南大学;2009年
3 孔为民;Ad-p53及联合化、放疗对人宫颈癌HeLa细胞作用的研究[D];中国协和医科大学;2001年
4 李新国;NS-398作用人宫颈癌的差异蛋白质组学研究[D];中南大学;2006年
5 干晓琴;腹腔镜CO_2气腹对人宫颈癌CaSki细胞体外生长的影响及其机制的研究[D];重庆医科大学;2007年
6 成海恩;RNAi沉默人宫颈癌CaSki细胞HPV-16 E6基因表达的研究[D];重庆医科大学;2006年
7 韩晓兵;热休克蛋白和p53在BK通道介导的肿瘤细胞凋亡与增殖抑制中的作用[D];华中科技大学;2006年
相关硕士学位论文 前10条
1 李楠;CO_2对人宫颈癌Hela细胞VEGF-C和MMP9表达的影响[D];河北联合大学;2014年
2 刘会芳;叶黄素对人宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响[D];兰州大学;2015年
3 米合勒阿衣·艾克帕;异常黑胆质成熟剂总黄酮抑制人宫颈癌HeLa、SiHa细胞增殖作用的研究[D];新疆医科大学;2015年
4 史育萌;中药清毒栓对人宫颈癌Hela细胞抑制作用的实验研究[D];长春中医药大学;2015年
5 任艳珍;莪术水煎液对人宫颈癌裸鼠移植瘤模型抗肿瘤作用的研究[D];山西中医学院;2015年
6 曾婧;异紫堇碱对人宫颈癌SiHa细胞裸鼠皮下移植瘤影响的研究[D];甘肃中医药大学;2016年
7 李婧;RNA干扰沉默HPV16 E6基因对人宫颈癌SiHa细胞自噬的影响[D];山西医科大学;2016年
8 钟晶晶;下调RbAp48表达对人宫颈癌细胞增殖转移的抑制作用及其机制的研究[D];南方医科大学;2016年
9 刘怡;洋椿苦素体外对人宫颈癌Hela细胞增殖抑制作用的研究[D];成都中医药大学;2016年
10 周晨;5-烯丙基-7-二氟甲氧基白杨素对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响[D];南华大学;2010年
,本文编号:1780149
本文链接:https://www.wllwen.com/yixuelunwen/fuchankeerkelunwen/1780149.html