CKS2在子宫平滑肌肉瘤中的表达及其对肿瘤生物学行为影响的研究

发布时间：2018-04-30 12:29

本文选题：子宫平滑肌肉瘤 + CKS2　；参考：《山东大学》2017年硕士论文

【摘要】：背景子宫平滑肌肉瘤(uterine leiomyosarcoma,ULMS)是临床上发病率较低的妇科恶性肿瘤,但它是子宫体最常见的肉瘤之一,占子宫全部恶性肿瘤的1.5%,约占子宫肉瘤的40%。其特点为转移发生早,复发率高,预后差。细胞周期蛋白依赖性激酶亚基2(cyclin-dependent kinase subunit,CKS2)是广泛分布于真核生物细胞中的小分子蛋白,在哺乳动物早期胚胎发育、减数分裂和体细胞分裂中起重要作用。近期研究发现,CKS2在结肠癌、乳腺癌、宫颈癌等多种恶性肿瘤中都存在过度表达的情况,并对恶性肿瘤的发生发展起重要作用,但关于CKS2在子宫平滑肌肉瘤中的研究尚未见报道。本研究主要探讨子宫平滑肌肉瘤中CKS2的表达情况及其临床意义,并探究CKS2在子宫平滑肌肉瘤细胞中的作用及其作用机制。第一部分CKS2在子宫平滑肌肉瘤中的表达及其临床意义方法1.收集山东大学齐鲁医院和山东省立医院2005年-2015年之间38例子宫平滑肌肉瘤病例以及对照组38例子宫平滑肌瘤,完善病例临床资料。2.利用免疫组化方法检测子宫平滑肌肉瘤组和子宫平滑肌瘤组中CKS2蛋白的表达情况,并将免疫组化结果根据Formwitz评分标准进行评分。3.根据两组免疫组化评分结果,比较子宫平滑肌肉瘤组和子宫平滑肌瘤组中CKS2蛋白表达情况的差异;将子宫平滑肌肉瘤分为高表达组(≥4分)和低表达组(4分),统计分析CKS2蛋白的表达水平与子宫平滑肌肉瘤患者临床病理参数和预后的关系。结果1.CKS2在子宫平滑肌肉瘤和子宫平滑肌瘤中的表达主要定位于细胞核中。CKS2在子宫平滑肌肉瘤中高表达率为63.2%(24/38),在平滑肌瘤中高表达率为18.4%(7/38)。与子宫平滑肌瘤相比,CKS2在子宫平滑肌肉瘤中的表达水平明显上调,差异有统计学意义(p=0.000)。2.统计结果显示,CKS2高表达组的肿瘤体积更大(p=0.014),孕激素受体的表达水平下调(p=0.048),CKS2的表达与患者年龄、FIGO分期、雌激素受体表达水平无明显关系。3.Kaplan—Meier分析显示在子宫平滑肌肉瘤中CKS2高表达组的病人预后比低表达组差(Log Rank Chi-square=4.735,p0.05)。Cox 比例风险模型多因素分析表明CKS2的过表达(Risk ratio,RR=3.124,p=0.036)和FIGO分期是子宫平滑肌肉瘤患者的独立预后因子(Risk ratio,RR=2.087,p=0.001)。结论1.在子宫平滑肌肉瘤和子宫平滑肌瘤中,CKS2主要定位于细胞核中。与子宫平滑肌瘤相比,CKS2在子宫平滑肌肉瘤中表达明显上调。2.在子宫平滑肌肉瘤中,CKS2高表达组的肿瘤体积更大,孕激素受体的表达下调,CKS2的高表达预示着较差的预后。CKS2的表达和FIGO分期是子宫平滑肌肉瘤患者的独立预后因素。第二部分CKS2对子宫平滑肌肉瘤细胞生物学行为的影响及其作用机制的研究方法1.设计并合成CKS2特异性的的siRNA,以脂质体为介导转染子宫平滑肌肉瘤(ULMS)细胞株(SK-UT-1和SK-UT-1B),干扰CKS2基因的表达,并设立对照组。2.转染一定时间后收集试验组和对照组肿瘤细胞,提取细胞中RNA及蛋白质,分别利用RT-qPCR和western blot方法检测CKS2基因的mRNA的表达情况和CKS2蛋白的表达情况,检测CKS2的干扰效率。3.利用CCK8方法检测实验组和对照组0-96h ULMS细胞增殖情况并绘制细胞生长曲线。4.检测干扰CKS2后对ULMS细胞迁移和浸润的影响:利用Transwell小室和铺胶小室检测试验组和对照组中ULMS细胞迁移和浸润情况。5.检测干扰CKS2对ULMS细胞平板克隆形成能力的影响:利用平板克隆形成实验检测试验组和对照组中ULMS细胞平板克隆形成能力。6.检测干扰CKS2对ULMS细胞周期的影响:将待测细胞用PI染色,利用流式细胞技术,检测试验组和对照组中肿瘤细胞周期情况,统计分析两组的差异。7.检测干扰CKS2后对ULMS细胞凋亡的影响:将待测细胞用AnnexinV-FITC/PI双染后,利用流式细胞技术,检测试验组和对照组中ULMS细胞凋亡情况,统计分析两组的差异。8.检测干扰CKS2后对ULMS细胞中蛋白质表达改变:利用western blot方法检测试验组和对照组中蛋白表达水平,统计分析两组的差异。结果1.SK-UT-1和SK-UT-1B细胞在转染.si-CKS2后,CKS2的mRNA和蛋白表达均有明显下降,差异具有统计学意义(p0.01,p0.05)。2.细胞生长曲线结果表明,SK-UT-1和SK-UT-1B细胞分别在转染si-CKS2后48h和24h后增殖能力出现明显下降,差异具有统计学意义。3.SK-UT-1和SK-UT-1B细胞在转染si-CKS2后,细胞迁移及浸润能力均下降,差异具有统计学意义(p0.01,p0.01)。4.SK-UT-1和SK-UT-1B细胞中,si-CKS2转染组克隆形成数量减少,差异具有统计学意义(p0.01,p0.01)。5.SK-UT-1和SK-UT-1B细胞在转染si-CKS2后,G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降,细胞被阻滞于G1期。6.SK-UT-1和SK-UT-1B细胞在转染si-CKS2后,干扰组的细胞凋亡率与对照组相比无明显改变,差异无统计学意义(p0.05)。7.SK-UT-1和SK-UT-1B细胞在转染si-CKS2后,cyclin A2表达下降,claudin 1,p-AKT,p-ERK,p-P38 和 Bax 无明显改变。结论1.CKS2在SK-UT-1和SK-UT-1B细胞株中均有表达。2.CKS2可以促进ULMS细胞的增殖、迁移、浸润和体外平板克隆的形成,促进ULMS细胞G1/S期的转化,对ULMS细胞的凋亡无明显影响。CKS2可通过上调cyclin A2表达发挥作用。
[Abstract]:The expression of CKS2 in uterine smooth muscle sarcoma and the clinical significance of CKS2 protein in uterine smooth muscle sarcoma were investigated . Multivariate analysis of Cox proportional hazard model showed that overexpression of CKS2 ( Risk ratio , RR = 3.124 , p = 0.036 ) and FIGO staging were independent prognostic factors for patients with uterine smooth muscle sarcoma ( Risk ratio , RR = 2.087 , p = 0.001 ) . The effects of CKS2 on the cell cycle of ULMS cells were determined by means of the method of flow cytometry , the expression of CKS2 mRNA and the expression of CKS2 protein were detected by using the method of flow cytometry . Conclusion 1 . CKS2 can promote the proliferation , migration , infiltration of ULMS cells and the formation of plate clones in vitro , promote the transformation of ULMS cells G1 / S phase , and have no significant effect on the apoptosis of ULMS cells . CKS2 can regulate the expression of cyclin A2 .

【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.33

【参考文献】