PI3K抑制剂联合MEK抑制剂对耐顺铂卵巢癌细胞株增殖协同抑制作用及机制研究

发布时间：2018-05-14 17:17

  本文选题：LY294002 + AZD6244　； 参考：《重庆医科大学》2014年硕士论文

【摘要】：目的：研究磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）特异性抑制剂LY294002联合丝裂原活化蛋白激酶激酶（MEK）特异性抑制剂AZD6244对耐顺铂卵巢癌细胞株（SKOV3/DDP）增殖的影响，并探讨其可能机制。 方法： （1）MTT法检测SKOV3/DDP细胞的耐药性。 （2）MTT法检测LY294002（5、10、20μmol/L）、AZD6244（1、2、4μmol/L）单独及联合作用对SKOV3/DDP细胞增殖的影响，Chou-Talalay联合指数法计算半数抑制浓度（Inhibitory concentration50％，IC50）及合用指数（Confidence interval，CI）。 （3）根据MTT结果确定联合用药的浓度，将实验分为对照组、LY294002组（5μmol/L）、AZD6244组(7μmol/L)及联合组(LY2940025μmol/L+AZD62447μmol/L);作用48h后，采用MTT法绘制细胞生长0d、1d、2d、3d、4d、5d的曲线。 （4）计算各组细胞倍增时间。 （5）平板克隆实验检测各组细胞集落形成能力。 （6）AnnexinⅤ-PE/7-ADD染色结合流式细胞术(FCM)检测各组细胞凋亡率，并测定细胞周期。 （7）Western blot法检测各组细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化的ERK1/2（P-ERK1/2）、AKT、磷酸化的AKT(P-AKT)、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）及激活型Caspase3蛋白的水平。 结果： （1）SKOV3/DDP细胞顺铂的IC50为2.3512μg/ml, SKOV3细胞顺铂的IC50为0.3035μg/ml，SKOV3/DDP细胞耐药指数为7.7471。 （2）不同浓度的LY294002及AZD6244均可抑制SKOV3/DDP细胞增殖，作用48小时IC50分别为（30.69±1.12）μmol/L及（76.26±2.17）μmol/L，两药联合作用IC50为（11.75±0.19）μmol/L，两药联合时，其中LY294002为5μmol/L，AZD6244为7μmol/L，分别为单药的1/6及1/10，CI＜1，两药联合作用具有协同作用。 （3）联合组细胞的生长速度较单药组及对照组慢。 （4）各组细胞倍增时间分别为：对照组（37.43±0.53）h，LY294002组（38.95±1.36）h，AZD6244组（42.15±1.96）h，联合组（46.92±1.39）h。联合组细胞倍增时间较单药组及对照组明显延长(P＜0.05)。 （5）各组集落形成数目分别为：对照组（115±4.51）/103细胞，LY294002组集落数为（90.34±4.73）/103细胞，AZD6244组集落数为（79.67±3.51）/103细胞，联合组集落数为（62±6.25）/103。联合组集落形成数较单药组及对照组明显减少(P＜0.01)。 （6）FCM显示各组细胞凋亡率分别为：对照组（2.67±0.37）%，LY294002组（12.08±3.22）%，AZD6244组（20.35±0.97）%，联合组（52.39±3.52）%。联合组凋亡率较单药组及对照组增高。各组阻滞于G1期的细胞比例分别为：对照组(40.15±2.70)%，LY294002组(54.00±1.58)%，AZD6244组(63.84±1.02)%，，联合组(77.84±1.26)%；阻滞于S期的细胞比例分别为：对照组(43.05±4.79)%，LY294002组(28.47±1.50)%，AZD624组(23.10±3.25)%，联合组(10.64±0.77)%。联合组阻滞于G1期的细胞比例明显增多（P＜0.05），S期明显减少（P＜0.05），PI显著降低。 （7）Western blot结果显示，AKT、 ERK1/2蛋白表达水平在各组间无明显差异（P＞0.05）；LY294002组P-AKT水平降低，P-ERK水平增高； AZD6244组P-ERK水平降低，P-AKT水平增高；联合组P-AKT、P-ERK水平均较单药组及对照组降低，Cyclin D1表达较其余各组低，激活型Caspase-3较其余各组高(P＜0.05)。 结论：PI3K抑制剂LY294002联合MEK抑制剂AZD6244通过促进细胞凋亡及阻滞细胞周期进展协同抑制SKOV3/DDP细胞的生长，这为耐药卵巢癌的治疗提供了新的理论依据。
[Abstract]:Objective: To study the effect of phosphatidylinositol 3 kinase (PI3K) specific inhibitor (LY294002) and mitogen activated protein kinase kinase (MEK) specific inhibitor AZD6244 on the proliferation of cisplatin resistant ovarian cancer cell line (SKOV3/DDP), and to explore its possible mechanism.
Method锛

本文编号：1888785