CD133、ALDH1在卵巢癌细胞系Hey-A8、OVCAR-8及其干性细胞球中表达的基础研究

发布时间：2018-06-16 05:15

本文选题：卵巢癌 + 干细胞　；参考：《大连医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：背景:卵巢癌是妇科三大恶性肿瘤之一,在我国的发病率居第三位,目前卵巢癌是妇科肿瘤中死亡率最高的恶性肿瘤[1]。造成卵巢癌高死亡率的主要原因是由于70%的患者诊断时都已是中晚期,这些患者又会有70%以上出现肿瘤的复发;并且很多患者发生耐药复发而最终导致死亡[2]。近年来相关研究提出了卵巢癌干细胞的观点,认为卵巢癌干细胞的存在可能是卵巢癌耐药复发的重要因素之一,干细胞的存在增强了肿瘤的形成能力与耐药性[3]。迄今为止,卵巢癌干细胞的研究一直具有挑战性,如何鉴定这类具有特殊生物学行为的细胞群成为目前干细胞研究的重点和难点;所以寻找到不同肿瘤干细胞表面表达的不同生物标记物成为鉴定干细胞的重要方法之一。目前关于卵巢癌干细胞相关标记物的研究主要有CD133、CD24、CD44、CD117和ALDH1等。相关文献报道显示[4],目前CD133、CD44以及CD117已被广泛认为是卵巢癌干细胞的特异性标记物,而CD24及ALDH1并没有明确定论。ALDH1在许多实体瘤中已经被认为是肿瘤干细胞的标记物,而在卵巢癌干细胞中却尚无定论,但是目前在部分人类卵巢癌组织与细胞系中都能检测到ALDH1的表达,并且在卵巢癌细胞系中,ALDH1表达的细胞更具有化学药物抵抗性,与ALDH1阴性细胞相比,ALDH1表达的肿瘤细胞生长更快[5]。所以ALDH1是否也能够和CD133一样成为卵巢癌干细胞的特异性标记物,成为目前研究的热点。目前研究干细胞常用的实验方法是无血清培养法诱导培养具有干细胞特性的悬浮细胞球,因此本实验通过该方法培养具有干细胞特性的悬浮细胞球,采用免疫荧光检测悬浮细胞球中CD133、ALDH1的表达情况,与细胞系比较二者表达的差异,从而初步推断ALDH1能否成为卵巢癌干细胞的标记物。目的:从细胞系及耐药细胞株中通过无血清法培养出悬浮细胞球,即卵巢癌干细胞;检测CD133、ALDH1在悬浮细胞球与细胞系、耐药细胞株中的表达情况,推断ALDH1能否与CD133一致成为卵巢癌干细胞有优势的标记物。方法:选择卵巢癌细胞系SKOV3、Hey-A8、OVCAR-8,筛选出成球较好的细胞系。并建立其耐药细胞株Hey-A8-DDP、OVCAR-8-DDP。用Western-blot的方法检测卵巢癌细胞系Hey-A8、OVCAR-8及耐药株Hey-A8-DDP、OVCAR-8-DDP中CD133、ALDH1的表达。将卵巢癌细胞系Hey-A8、OVCAR-8及耐药细胞株Hey-A8-DDP、OVCAR-8-DDP通过无血清培养法诱导培养悬浮细胞球。采用免疫荧光染色法分别检测细胞系和耐药细胞株培养出来的悬浮细胞球CD133、ALDH1的表达,并且与细胞系比较二者表达的差异。结果:1.卵巢癌细胞系Hey-A8和OVCAR-8及其耐药细胞株Hey-A8-DDP、OVCAR-8-DDP通过无血清培养法成功培养出悬浮球细胞,观察至第8天,与细胞系Hey-A8、OVCAR-8相比,其对应的耐药细胞株的悬浮细胞球体积更大,形态更规则,成球性更强。2、卵巢癌耐药细胞株Hey-A8-DDP中ALDH1的表达较卵巢癌细胞系Hey-A8高。卵巢癌细胞系OVCAR-8及耐药细胞株OVCAR-8-DDP中ALDH1无明显表达;上述细胞系及耐药细胞株均未检测到CD133的表达。3、卵巢癌细胞系Hey-A8、OVCAR-8及其耐药细胞株Hey-A8-DDP、OVCAR-8-DDP培育出的悬浮细胞球经免疫荧光染色后,CD133、ALDH1均明显表达,而在两种耐药细胞株的悬浮细胞球中二者均超过相对应的细胞系而呈更高表达;同时CD133、ALDH1在OVCAR-8细胞系及耐药细胞株OVCAR-8-DDP中及其细胞球的差别的更为明显。结论:1、卵巢癌细胞系Hey-A8和OVCAR-8及耐药细胞株Hey-A8-DDP、OVCAR-8-DDP中均筛选出卵巢癌干细胞,且在耐药细胞株中卵巢癌干细胞更为富集,从而推断卵巢癌干细胞的存在是卵巢癌耐药复发的重要原因之一。2、ALDH1在培育出的能够代表卵巢癌干细胞的悬浮细胞球中高表达,而在细胞系与耐药细胞株中部分表达或不表达,提示ALDH1可能与CD133一样,成为卵巢癌干细胞有意义的生物学标记物。3、CD133、ALDH1在所有培育出的悬浮细胞球中均共同高表达,二者联合检测,可增加卵巢癌干细胞筛选的成功率。
[Abstract]:Background : Ovarian cancer is one of the three major malignant tumors of gynecology . In China , the incidence of ovarian cancer is the third , and ovarian cancer is one of the most common malignant tumors in gynecological tumors . The primary cause of high mortality in ovarian cancer was that 70 % of patients were diagnosed with late middle and late stages , with more than 70 % of these patients experiencing recurrent tumor recurrence , and many patients experienced drug - resistant relapse and eventually led to death . In recent years , the research of ovarian cancer stem cells suggests that the presence of ovarian cancer stem cells may be one of the most important factors in ovarian cancer recurrence , and the presence of stem cells enhances the formation and drug resistance of ovarian cancer cells . So far , the research of ovarian cancer stem cells has been challenging . How to identify these cells with special biological behavior has become the focus and difficulty of stem cell research . The expression of CD133 and ALDH1 in ovarian cancer cell lines were investigated by means of immunofluorescence staining . The ovarian cancer stem cells were screened from OVCAR - 8 - DDP , and the ovarian cancer stem cells were more enriched in the drug resistant cell lines .
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.31

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