sCD40L及17-AAG逆转上皮性卵巢癌细胞对顺铂耐药的研究

发布时间：2018-06-18 22:29

  本文选题：卵巢癌 + sCD40L　； 参考：《河北医科大学》2014年硕士论文

【摘要】：目的：卵巢癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，已成为首要死亡原因。由于在疾病早期，症状较隐匿，多数病人确诊时已进入晚期阶段。且由于在临床治疗过程中，对化疗药物的耐药更使得卵巢癌患者预后差、死亡率高。因此，，探讨改善卵巢癌细胞的耐药以及增强化疗药物敏感性成为亟待解决的问题。研究表明，在存在CD40表达的肿瘤细胞中，sCD40L（可溶性CD40配体）可抑制细胞的增殖，具有调节肿瘤细胞生长及诱导凋亡的作用。格尔德霉素衍生物17-AAG（17-烯丙胺基一17一脱甲氧基格尔德霉素）是一种Hsp90抑制剂，有较强的抗肿瘤作用。17-AAG已在乳癌、白血病、前列腺癌等研究中表现出抗肿瘤活性，其主要通过抑制肿瘤侵袭、降低耐药性及诱导凋亡而发挥作用。关于sCD40L及17-AAG抑制卵巢癌细胞生长的作用机制报道较少。本实验的相关前期研究发现：sCD40L及17-AAG对卵巢癌细胞的增殖均有抑制作用，且随药物浓度的增加抑制率增高。sCD40L联合顺铂作用于SKOV3细胞可能通过下调survivin mRNA、上调caspase-3mRNA及caspase-9mRNA而诱导细胞凋亡。sCD40L联合顺铂作用于SKOV3/DDP细胞可能通过下调MDR1mRNA、LRP mRNA、GST-π mRNA及survivin mRNA而逆转耐药。sCD40L作用于两种细胞，抑制作用无显著差异。17-AAG的增殖抑制作用在SKOV3/DDP细胞中明显强于SKOV3细胞。sCD40L及17-AAG分别联合顺铂作用于卵巢癌细胞后均可逆转耐药性。本实验旨在检测sCD40L及17-AAG作用于卵巢癌细胞后相关耐药蛋白及凋亡抑制蛋白的表达情况、探讨可能的作用机制。 方法： 1MTT法检测不同浓度的sCD40L、顺铂及两者联合应用对卵巢癌细胞SKOV3及SKOV3/DDP的增殖抑制作用，并计算药物作用细胞后48小时的IC50值及逆转倍数。 2Western-blot法检测顺铂、sCD40L及sCD40L联合顺铂处理卵巢癌细胞SKOV3及SKOV3/DDP前后细胞内GST-π，LRP，P53，Bcl-2及survivin蛋白的表达情况。 3MTT法检测不同浓度的17-AAG、顺铂及两者联合应用对卵巢癌细胞SKOV3及SKOV3/DDP的增殖抑制作用，并计算药物作用细胞后48小时的IC50值及逆转倍数。 4Western-blot法检测顺铂、17-AAG及17-AAG联合顺铂处理卵巢癌细胞SKOV3及SKOV3/DDP前后细胞内GST-π，LRP，P53，Bcl-2及survivin蛋白的表达情况。 结果： 1MTT法结果显示：不同浓度的sCD40L对卵巢癌细胞SKOV3及SKOV3/DDP细胞的增殖均具有抑制作用。随药物浓度的增加及作用时间延长，对SKOV3及SKOV3/DDP细胞的增殖抑制作用均增强，呈时间—剂量依赖关系。sCD40L作用于SKOV3细胞及SKOV3/DDP细胞48小时的IC50值分别是2.26μg/ml、2.33μg/ml。不同浓度的顺铂对两种细胞有增殖抑制作用，也呈时间—剂量依赖关系。顺铂对SKOV3细胞及SKOV3/DDP细胞48小时的IC50值分别是7.34μg/ml、27.06μg/ml。SKOV3/DDP细胞的耐药指数为3.69。sCD40L联合顺铂对SKOV3及SKOV3/DDP细胞均有明显的增殖抑制作用，且呈一定的时间—剂量依赖关系。1μg/ml及2μg/ml sCD40L联合顺铂作用于SKOV3细胞的IC50值分别是1.40μg/ml、1.05μg/ml，增敏倍数分别为5.24、6.99。1μg/ml及2μg/mlsCD40L联合顺铂作用于SKOV3/DDP细胞的IC50值分别是6.11μg/ml、2.95μg/ml，逆转倍数分别为4.43、9.17。1μg/ml sCD40L联合顺铂作用于SKOV3细胞及SKOV3/DDP细胞的q值分别为0.92、1.01。2μg/ml sCD40L联合顺铂作用于SKOV3及SKOV3/DDP细胞的q值分别为0.97、1.02。各组计算均得0.85≤q≤1.15，说明sCD40L与顺铂两药联用发挥相加作用。 2Western-blot法检测结果示：经顺铂单药、sCD40L单药、sCD40L联合顺铂处理SKOV3及SKOV3/DDP细胞48小时后，survivin、bcl-2蛋白表达量各组间两两比较，均无显著差异（P0.05）。在SKOV3细胞中survivin、bcl-2蛋白的表达量明显高于SKOV3/DDP细胞（P0.05）。在两种细胞中，2μg/ml sCD40L联合顺铂组的GST-π、LRP和p53蛋白表达水平，与空白对照组、DDP单药组及sCD40L单药组相比，两种蛋白表达均明显下降，差异有统计学意义（P0.05）。2μg/ml sCD40L联合顺铂组GST-π、LRP蛋白下降的幅度在SKOV3/DDP细胞中高于SKOV3细胞（P0.05）。联合组及顺铂组p53蛋白下降幅度在两种细胞间无显著性差异（P0.05）。 3MTT法结果显示：不同浓度的17-AAG对SKOV3及SKOV3/DDP细胞具有增殖抑制作用。且随着药物浓度的增加及作用时间的延长，增殖抑制作用明显增强，呈明显的时间—剂量依赖关系。17-AAG对SKOV3/DDP细胞的抑制作用明显强于SKOV3细胞，差异有统计学意义（P0.05）。17-AAG作用于SKOV3及SKOV3/DDP细胞48小时的IC50值分别是18.39μg/ml、7.35μg/ml。17-AAG联合顺铂对SKOV3及SKOV3/DDP细胞的IC50值分别是2.34μg/ml、1.24μg/ml，逆转倍数分别为3.14、5.92。17-AAG联合顺铂作用于SKOV3及SKOV3/DDP细胞的q值分别为0.95、1.01。两组计算均得0.85≤q≤1.15，说明17-AAG和顺铂联合应用发挥相加作用。 4Western-blot法检测结果示：经顺铂单药、17-AAG单药、17-AAG联合顺铂处理SKOV3及SKOV3/DDP细胞48小时后，GST-π、LRP及Bcl-2蛋白表达量各组间两两比较无显著差异（P0.05）。在SKOV3/DDP细胞中GST-π及LRP蛋白的表达明显高于SKOV3细胞中的表达，差异有统计学意义（P0.05）。在SKOV3细胞中Bcl-2蛋白的表达明显高于SKOV3/DDP细胞（P0.05）。联合组与顺铂单药组及17-AAG单药组相比，联合组survivin及p53蛋白的表达均下降，有统计学意义（P0.05）。联合组survivin及p53蛋白下降的幅度在两种细胞间均无显著差异（P0.05）。 结论： 1sCD40L联合顺铂对卵巢癌细胞有明显的增殖抑制作用。sCD40L联合顺铂对SKOV3/DDP细胞的耐药性有明显逆转作用。sCD40L可能通过下调卵巢癌细胞中的耐药基因GST-π、LRP及P53蛋白的表达，进而改善卵巢癌细胞的顺铂耐药性。 217-AAG联合顺铂对卵巢癌细胞的增殖有明显的抑制作用。17-AAG联合顺铂可明显逆转SKOV3/DDP细胞的耐药性。17-AAG可能通过下调卵巢癌细胞中的survivin及P53蛋白的表达，促进细胞凋亡而改善卵巢癌细胞对顺铂的耐药。
[Abstract]:Objective: ovarian cancer is one of the most common gynecologic malignancies and has become the leading cause of death. Because in the early stage of the disease, the symptoms are concealed and the majority of the patients have entered the advanced stage. And because in the process of clinical treatment, the resistance to chemotherapy drugs makes the ovarian cancer patients poor prognosis and the mortality is high. Therefore, the improvement of the ovary is to improve the ovary. The drug resistance of cancer cells and the enhancement of chemosensitivity have become an urgent problem. The study shows that in the tumor cells with CD40 expression, sCD40L (soluble CD40 ligand) can inhibit the proliferation of cells and regulate the growth of tumor cells and induce apoptosis. Oxcomycin is a kind of Hsp90 inhibitor, with strong anti-tumor effect,.17-AAG has shown antitumor activity in breast cancer, leukemia, prostate cancer and other studies. It mainly plays a role in inhibiting tumor invasion, reducing drug resistance and inducing apoptosis. The mechanism of action of sCD40L and 17-AAG to inhibit the growth of ovarian cancer cells The previous studies in this experiment have found that sCD40L and 17-AAG have inhibitory effect on the proliferation of ovarian cancer cells, and with the increase of inhibitory rate of drug concentration,.SCD40L combined with cisplatin may induce SKOV3 cells to induce apoptosis by down regulation of Survivin mRNA and up regulation of caspase-3mRNA and caspase-9mRNA to induce apoptosis in combination with cisplatin. The effect of SKOV3/DDP cells on MDR1mRNA, LRP mRNA, GST- PI mRNA and Survivin mRNA to reverse the resistance of.SCD40L to two cells, there is no significant difference in inhibitory effect of.17-AAG, which is significantly stronger in SKOV3/DDP cells than in SKOV3 cells and in combination with cisplatin in ovarian cancer cells. The aim of this experiment is to detect the expression of sCD40L and 17-AAG in ovarian cancer cells and to explore the possible mechanism of the expression of drug resistance protein and apoptosis suppressor protein.
Method锛

本文编号：2037082