豚鼠PCOS卵巢的诱导及其MMP的表达和潜在作用研究

发布时间：2018-06-26 05:16

本文选题：豚鼠 + 卵巢　；参考：《南京农业大学》2015年博士论文

【摘要】：多囊卵巢综合症(PCOS)是育龄妇女最为常见的内分泌紊乱疾病,是急待解决的临床问题之一。当前认为卵巢才是PCOS病理机制改变的原发部位。PCOS的主要特征是高雄激素症,高雄激素抑制了卵巢发育卵泡的成熟,并最终导致了卵巢囊状表现的出现。PCOS病因和病理机制至今尚未完全阐明,因此,动物模型对于进一步揭示PCOS的发情机制以及评估PCOS的治疗手段都显得极其重要。已有多种处理方法被用于介导PCOS啮齿类动物模型,如雄激素处理、雌激素处理、芳香化酶抑制剂处理、抗孕酮剂(如米非司酮)、持续光照或基因改造等。目前多种不同的实验动物已被用模拟人类PCOS繁殖和代谢症状,这其中包括非人类灵长类动物、大鼠、小鼠和绵羊。啮齿类动物卵巢激素分泌情况与人类不尽相同,而猕猴和绵羊等作为实验动物又过于昂贵。豚鼠作为人类生殖研究的良好模型,由于其发情周期与人类似,且成本低廉易操作,其作为PCOS模型动物具有比较大的潜力。基质金属蛋白酶(MMPs)参与了卵巢细胞迁移、细胞增殖、凋亡和组织形态发生的过程,因为卵巢的基本功能就是分泌激素和排卵,由此需要动态的、广泛的和周期性的组织再造。MMP-2和MMP-9参与了卵巢周期卵泡发育、排卵、黄体的形成和退化的过程。同时,基质金属蛋白酶/基质金属蛋白酶抑制剂(MMPs/TIMPs)的平衡紊乱可能是引起卵巢病变的原因之一,因为PCOS的卵巢MMPs/TIMPs平衡是失调的。因此研究MMP-2和MMP-9对于调控卵巢周期的表达特性对阐明PCOS的病理机制有着重要的意义。本论文以豚鼠为研究对象,重点研究豚鼠卵巢周期和豚鼠不同生长阶段卵巢上MMP-2和MMP-9的表达特性,以及研究豚鼠在经不同处理方法(eCG、丙酸睾酮、来曲唑)处理后卵巢MMP-2和MMP-9的表达特性。主要结果如下:1.豚鼠发情周期卵巢MMP-2、9表达特性为研究正常成年雌性豚鼠发情周期中卵巢上MMP-2和MMP-9的表达特性,通过观察豚鼠阴门外观和阴道脱落细胞涂片,确定豚鼠的发情周期。使用连续观察到2个以上正常发情周期的豚鼠,分别取处于发情前期和发情后期的豚鼠(n=6),采集豚鼠的卵巢,通过HE染色和IHC染色(StAR、MMP-2和MMP-9)并观察其表达特性。结果显示,MMP-2,-9和StAR在发情前期豚鼠卵巢的闭锁卵泡的颗粒细胞和卵泡膜细胞上有明显表达,而它们在发情后期豚鼠卵巢黄体上也有强表达。2.初生豚鼠经eCG处理卵巢MMP-2、9表达特性采取3日龄和8日龄初生豚鼠分别注射5 IU eCG和生理盐水(n=6),2天后采集豚鼠卵巢,通过HE和IHC染色观察eCG对初生豚鼠卵巢的作用。结果显示,3日龄、5日龄、10日龄正常豚鼠卵巢上卵泡形态变化明显,有腔卵泡的数量呈逐渐增多趋势,10日龄豚鼠上可见大的有腔闭锁卵泡。初生豚鼠卵巢对激素已有较强敏感性,eCG对初生豚鼠卵巢的卵泡发育没有起到类似FSH的促卵泡作用,而是发挥了类似LH的作用。MMP-2和MMP-9通过参与细胞增殖和组织形态发生过程参与了初生豚鼠卵巢卵泡的发育,而MMP-2和MMP-9对eCG可能具有不同的敏感性或发挥不同功能。3.豚鼠经丙酸睾酮处理卵巢MMP-2、9表达特性18只正常发情期豚鼠随机分为3组(n=6):T-1组豚鼠每天注射1 mg/100 g体重的TP(28天),T-2组豚鼠每天注射2 mg/100 g体重的TP(28天),对照组注射生理盐水。试验结束后检测豚鼠血清睾酮、孕酮、雌二醇和浓度,卵巢切片进行HE和IHC染色,观察卵巢上StAR、PCNA、MMP-2和MMP-9的表达特性。结果表明,豚鼠经28天连续TP注射后,豚鼠血清睾酮浓度随注射量的增加而大幅度提升,引起豚鼠持续不排卵。豚鼠经一定剂量丙酸睾酮注射可模拟了人类PCOS的2大生殖特征:无排卵和高雄激素症。另外,经高剂量丙酸睾酮注射豚鼠可能是人类PCOS自我恢复良好的动物模型。MMP-2、MMP-9共同参与了豚鼠卵巢上卵泡的生长及闭锁过程,豚鼠卵巢上有腔闭锁卵泡的增多可能与MMP-2的高表达有关。4.豚鼠经来曲唑处理卵巢MMP-2、9表达特性豚鼠每日灌服1 mg/kg和2 mg/kg来曲唑,对照组灌服生理盐水(n=6,21天和28天)。试验结束后测定豚鼠血清睾酮、孕酮和雌二醇浓度,豚鼠卵巢切片经HE、IHC染色(StAR、PCNA、MMP-2和MMP-9)及明胶酶谱分析。结果显示,经来曲唑处理豚鼠血清睾酮浓度随来曲哇使用剂量和处理时间的增加而提高,而雌二醇和孕酮浓度则相反。豚鼠经来曲唑处理卵巢未见黄体,即来曲唑抑制了豚鼠卵巢排卵,处理后卵巢上有腔卵泡数量随来曲唑使用剂量和处理时间的增加而增多。活性MMP-2和MMP-9通过在有腔卵泡颗粒细胞层和卵泡膜细胞层的表达,广泛的参与了豚鼠经来曲唑处理后卵巢多囊的生成过程。总之,MMP-2和MMP-9都参与了豚鼠卵巢的形态变化,MMP-2和MMP-9在初生豚鼠卵巢上对eCG具有不同反应性,豚鼠经丙酸睾酮和来曲唑诱导后卵巢有腔卵泡的增多伴随卵巢MMP-2表达的增强和MMP-9表达的减弱。
[Abstract]:This paper studies the expression of MMP - 2 and MMP - 9 in women with PCOS . The levels of serum testosterone , MMP - 2 and MMP - 9 in guinea pigs were studied by HE , IHC staining in guinea pigs ( n = 6 , 21 days and 28 days ) .
【学位授予单位】：南京农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R711.75

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