TGF-β1诱导人子宫颈腺癌Hela细胞上皮间质转化的实验研究

发布时间：2018-07-12 20:02

  本文选题：宫颈腺癌 + TGF-β1　； 参考：《泸州医学院》2014年硕士论文

【摘要】：目的：宫颈癌是女性妇科三大恶性肿瘤之一，宫颈腺癌是宫颈癌第二多见的组织学类型，约占宫颈癌的10%，宫颈腺癌较宫颈鳞癌更易于发生转移，预后差。近年来研究发现上皮间质转化（Epithelial-MesenchymalTransitions，EMT）与肿瘤的发生发展有重要联系。转化生长因子β1（Transforming growth factor beta1，TGF-β1）已被证实是上皮间质转化的重要诱导剂，本实验拟通过体外培养人宫颈腺癌Hela细胞，在TGF-β1诱导下体外构建Hela细胞上皮间质转化模型，研究其对Hela细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响。方法：体外培养人宫颈腺癌Hela细胞，分为实验组：用不同浓度TGF-β1（0.01、0.1、1、10ng/ml）刺激Hela细胞，对照组：用不含TGF-β1的无血清培养基培养Hela细胞。①用不同浓度TGF-β1（0.01、0.1、1、10ng/ml）刺激Hela细胞后于不同时间点观察其细胞形态变化；②不同浓度TGF-β1刺激Hela细胞72h后，用半定量RT-PCR法检测上皮间质转化相关标记物E-cadherin及Vimentin mRNA表达情况；③不同浓度TGF-β1刺激Hela细胞后，细胞免疫组织化学方法检测E-cadherin，Vimentin蛋白的表达变化；④用CCK8法检测不同浓度TGF-β1刺激Hela细胞后对其增殖影响；⑤用流式细胞仪检测不同浓度TGF-β1刺激Hela细胞72h时对其凋亡的影响；⑥用10ng/ml TGF-β1刺激Hela细胞后用划痕实验检测其细胞迁移能力的变化。结果：①倒置显微镜下观察到不同浓度TGF-β1刺激Hela细胞24h时与对照组相比形态未发生明显变化；刺激48h时就开始出现变化，细胞伸出许多小突出，部分失去多边形或立方形形态变为梭形；刺激72h后变化更明显，与对照组比较，实验组大部分细胞呈现明显的间质细胞形态，表现为细胞拉长呈梭形或纺锤形，细胞的间隙变宽，细胞与细胞之间的连接变得松散，细胞由铺路石样分布变为不规则的分布；②RT-PCR检测结果显示：TGF-β1刺激后，Hela细胞的上皮标记物E-cadherin mRNA表达下调，间质标记物Vimentin mRNA表达上调且均呈浓度依赖性，，与对照组相比差异有统计学差异（P0.05）；③细胞免疫组织化学结果显示：TGF-β1刺激后，随着TGF-β1浓度的增加E-cadherin蛋白的表达逐渐降低，Vimentin蛋白的表达则逐渐升高，与对照组相比差异有统计学意义（P0.05）；④CCK-8检测结果显示：TGF-β1刺激后，24h时不同浓度TGF-β1对Hela细胞增殖无明显作用，与对照组相比差异无统计学意义（P0.05），48h和72h后对Hela细胞生长增殖起抑制作用，与对照组相比差异有统计学意义（P0.05），且呈时间和浓度依赖性；⑤流式细胞仪检测结果显示：TGF-β1刺激人宫颈腺癌Hela细胞72h时，随着TGF-β1浓度的增加Hela细胞的凋亡率也逐渐增加，与对照组相比差异有统计学意义（P0.05）；⑥10ng/ml TGF-β1刺激Hela细胞后其迁移能力增强。结论：①TGF-β1可以诱导人宫颈腺癌Hela细胞发生上皮间质转化；②TGF-β1对人宫颈腺癌Hela细胞的生长增殖起抑制作用并能诱导其发生凋亡；③TGF-β1可增强子宫颈腺癌Hela细胞的迁移能力。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of transforming growth factor - 尾1 ( 0.01 , 0.1 , 1 , 10 ng / ml ) on Hela cells .
( 2 ) The expression of E - cadherin and vimentin was detected by semi - quantitative RT - PCR after 72 h of Hela cells stimulated by TGF - 尾1 at different concentrations .
( 3 ) After stimulated Hela cells with different concentrations of TGF - 尾1 , the expression of E - cadherin and Vimentin was detected by immunohistochemical method .
( 4 ) The effect of TGF - 尾1 stimulated Hela cells on the proliferation of Hela cells was detected by CC8 method .
( 5 ) The effect of TGF - 尾1 stimulated by different concentrations of TGF - 尾1 on the apoptosis of Hela cells was detected by flow cytometry .
( 6 ) After stimulated Hela cells with 10 ng / ml TGF - 尾1 , the changes of cell migration ability were detected by scratch test . Results : 鈶

本文编号：2118316