一种基于适配体的快速检测宫颈癌标志物P16INK4A的方法

发布时间：2018-11-14 11:55

【摘要】：目的提出一种可快速检测宫颈癌标志物P16INK4A的方法。方法构建重组质粒P16INK4A-pET28a,在大肠埃希菌中表达P16INK4A,利用亲和层析纯化,Western blot法验证。以纯化的重组蛋白作靶标,利用指数级富集配体的系统进化技术(SELEX)筛选其特异性适配体,通过分析其亲和力最终选出一条高亲和力、高特异性的适配体。枸橼酸钠还原法制备13nm纳米金颗粒并表征。建立基于免标记纳米金和适配体的分析方法,并对其进行方法学的考察。结果成功表达并纯化了P16INK4A蛋白,筛选出一条抗重组P16INK4A的高亲和力、高特异性的适配体,利用该适配体和免标记的纳米金建立了一种可快速检测宫颈癌标志物P16INK4A的分析方法。结论该方法具有较好的准确度和精密度,有望显著提高早期宫颈癌的检出率。
[Abstract]:Objective to develop a method for rapid detection of cervical cancer marker P16INK4A. Methods Recombinant plasmid P16INK4A-pET28awas constructed and expressed in Escherichia coli. The recombinant plasmid P16INK4A was purified by affinity chromatography (, Western blot). The purified recombinant protein was used as the target, and its specific aptamer was screened by the systematic evolution technique of exponential enrichment ligand (SELEX), and a high affinity and high specificity aptamer was selected by analyzing its affinity. 13nm nanoparticles were prepared by sodium citrate reduction method and characterized. An analysis method based on non-labeled nano-gold and aptamer was established and investigated. Results P16INK4A protein was successfully expressed and purified, and a high affinity and specificity aptamer of anti-recombinant P16INK4A was screened out. A rapid detection method for cervical cancer marker P16INK4A was established by using this aptamer and non-labeled nano-gold. Conclusion this method has good accuracy and precision, and can improve the detection rate of early cervical cancer.
【作者单位】： 武汉市医疗救治中心;华中科技大学同济医学院基础医学院病原生物学系;
【基金】：湖北省科技厅资助项目(No.2011GIA051)
【分类号】：R737.33

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本文编号：2331088